Игх при раке легкого


Важнейшим пунктом при диагностике раковых заболеваний является иммуногистохимическое исследование. Ежедневно в организм человека проникают микроорганизмы, способные запустить развитие патологического процесса. Защитные силы противостоят этому, образуя антитела. Эта реакция и легла в основу создания ИГХ-исследования.

Суть метода

Данный способ диагностики раковых заболеваний является наиболее современным и достоверным. В процессе развития опухолевого процесса образуются чужеродные организму белки – антигены. В это же время иммунная система вырабатывает антитела, главная цель которых – предотвращение размножения патогенных микроорганизмов.

Задачей иммуногистохимического исследования является своевременное выявление раковых клеток. Для этого биологический материал пациента обрабатывается множеством антител, после чего тщательно изучается под микроскопом. Если данные белковые соединения свяжутся с опухолевыми клетками, будет визуализироваться их свечение. Возникновение эффекта флюоресценции и свидетельствует о наличии в организме раковых клеток.

На сегодняшний день в распоряжении специалистов, осуществляющих ИГХ-исследование, имеются практически все антитела к различным видам опухолей, что служит залогом получения достоверных результатов.

Возможности

Современный вид диагностики позволяет определить:


  • распространение опухолевого процесса;
  • скорость роста злокачественных новообразований;
  • вид опухоли;
  • источник метастазов;
  • уровень злокачественности.

Кроме того, с помощью иммуногистохимического исследования может оцениваться степень эффективности лечения раковых заболеваний.

Показания и противопоказания

С помощью данного способа существует возможность изучения любых тканей человеческого организма. Главным основанием для назначения иммуногистохимического исследования является подозрение о наличии злокачественного образования.

В этом случае метод используется для:

  • определения вида опухоли и области её локализации;
  • обнаружения метастазов;
  • оценки активности опухолевого процесса;
  • выявления патологических микроорганизмов.

Также анализ эффективен при проблемах с зачатием.

Иммуногистохимическое исследование эндометрия показано при:

  • бесплодии;
  • заболеваниях матки;
  • наличии патологий в органах репродуктивной системы;
  • невынашивании беременности;
  • хронических заболеваниях эндометрия.

Кроме того, ИГХ-исследование назначается пациенткам, у которых не наступает беременность даже после нескольких попыток экстракорпорального оплодотворения. Метод позволяет определить, имеются ли в организме клетки, снижающие вероятность зачатия.

Противопоказаний к ИГХ-исследованию не существует. Единственным фактором, из-за которого невозможно провести анализ, является непреодолимая сложность при заборе биоматериала пациента.

Как проводится

В первую очередь методом биопсии получают образец ткани больного. Реже забор материала осуществляется в процессе эндоскопического обследования или хирургического вмешательства. Способ получения образца зависит от вида опухоли и её локализации.

Важным нюансом является то, что забор материала при первичном обследовании должен осуществляться до начала лечения. В противном случае результаты исследования могут быть искажены.

После забора биоматериала его помещают в формалин и отправляют в лабораторию, где он подвергается следующей обработке:

  1. Образец ткани обезжиривается и заливается парафином. В данном виде биологический материал может храниться очень долго, за счёт чего ИГХ-исследование может быть проведено повторно.
  2. С образца собирают несколько тонких срезов и перемещают их на специальные стёкла.
  3. На них биоматериал окрашивается растворами различных антител. На данном этапе может применяться как малая панель, так и большая. В первом случае изучаются реакции после использования 5 видов антител, во втором – до нескольких десятков.
  4. В процессе иммуногистохимического исследования при раке любого органа появляется эффект флюоресценции, что даёт возможность специалисту определить вид злокачественных клеток.

Интерпретация результатов

Как правило, заключение готово через 7–15 дней. Срок зависит от вида используемой панели (малой или большой). Расширенный способ занимает больше времени.

Изучением срезов биоматериала занимается патологоанатом, имеющий знания и навыки (подтверждённые официальным документом), необходимые для проведения анализа.

При интерпретации результатов особое внимание обращается на показатель Ki-67. Именно он предоставляет информацию о степени злокачественности процесса. Например, если результат показателя после проведения иммуногистохимического исследования при раке молочной железы составляет не более 15%, считается, что прогноз более чем благоприятный. Уровень в 30% свидетельствует об активности опухолевого процесса, т.е. о быстрой скорости его развития. Как правило, она останавливается после курса химиотерапии.

По некоторым статистическим данным, если Ki-67 составляет менее 10%, итог заболевания будет благоприятным (в 95% случаев). Отметка в 90% и выше означает почти 100%-ный летальный исход.

Кроме показателя злокачественности, в заключении указываются:

  • антитела, к которым выявлено сходство (тропность);
  • вид раковых клеток, их количественное значение.

Важно понимать, что точный диагноз ставится после получения и изучения информации, собранной посредством всех проведённых диагностических процедур. Несмотря на то, что ИГХ-анализ считается наиболее информативным методом по сравнению с гистологией, иногда необходимо использовать оба способа. Расшифровкой иммуногистохимического исследования занимается исключительно онколог.

В заключение

В современной медицине особое внимание уделяется диагностике раковых заболеваний. Наиболее современным и информативным методом считается иммуногистохимическое исследование. С его помощью выявляется не только наличие раковых клеток, но и определяется их вид и скорость развития злокачественного процесса. Кроме того, на основании результатов производится оценка эффективности назначенного лечения.

Источник: FB.ru

Симптомы рака легкого отличаются вследствие различного положения и размеров опухоли у различных пациентов. Более выражены симптомы при его «центральном» расположении, то есть в тех случаях, когда рак растет вблизи крупных бронхов. В этих случаях на первое место будут выходить симптомы, связанные с полным или частичным перекрытием просвета бронха опухолью. Может появляться кашель, кровохарканье (примесь крови в мокроте), одышка. Помимо этого, могут быть симптомы, связанные с воспалением и интоксикацией, в том числе – частые и рецидивирующие воспалительные заболевания легких (например, затяжная или рецидивирующая пневмония).


В противоположность этому «периферический» рак легкого (растущий на периферии легочной ткани из конечных отделов бронхов) в течение длительного времени остается бессимптомным, некоторых пациентов беспокоят боль в грудной клетке и одышка. Эти симптомы часто встречаются и при других болезнях, которые не связаны с процессами роста опухоли, что затрудняет диагностику.

У многих пациентов рак легкого выявляется случайно, например, в ходе диагностического обследования при прохождении профилактического осмотра или диспансеризации. Окончательно подтвердить или опровергнуть наличие рака легкого может биопсия выявленного очага. Биопсия – получение материала опухоли или здоровой ткани для последующего микроскопического или молекулярно-генетического изучения.

В зависимости от расположения и размеров опухоли для выполнения биопсии могут быть использованы различные техники:

  • чрескожная биопсия, при которой игла вводится в опухоль снаружи (через кожу);
  • трансбронхиальная биопсия, при которой забор опухолевой ткани производится в ходе проведения бронхоскопии (эндоскопическое исследование дыхательных путей);
  • различные торакоскопические и открытые хирургические операции.

В последнее время появился еще один диагностический метод, так называемая «жидкостная» биопсия, в ходе которой проводится анализ наличия раковых клеток в обычном образце крови, получаемой из вены пациента. Этот метод имеет множество преимуществ, однако в настоящее время, наиболее часто, используется для уточняющей диагностики заболевания и, зачастую, не отменяет необходимость выполнения традиционной биопсии.

Лечение рака легкого зависит от ряда факторов, включая стадию заболевания, особенности её гистологического строения и молекулярно-генетический «портрет». Также принимается во внимание возраст пациента, его состояние здоровья, наличие сопутствующих хронических заболеваний, а также ряд других факторов.

Стадии заболевания

В зависимости от выраженности распространенности опухолевого процесса рак легкого делится по стадиям. Для стадирования рака легкого используется международная классификация TNM. Для определения стадии заболевания в системе TNM врач оценивает следующие параметры опухоли:

  • T (tumor, опухоль) – оценка распространенности первичной опухоли.
  • N (nodule, узел) – оценка вовлечения в опухолевый процесс расположенных близко к опухоли лимфатических узлов. N0 означает, что при обследовании не было выявлено вовлечения близлежащих лимфатических узлов, N1-3 – обнаружено вовлечение в опухолевый процесс лимфатических узлов. Большая цифра означает большую степень распространенности опухолевого процесса;
  • M (metastasis, метастазы) – оценка наличия отдаленных метастазов опухоли, например, метастатического поражения печени, костей, головного мозга или других органов. M0 означает, что при обследовании не было выявлено наличия отдаленных метастазов, M1 – выявлено вовлечение других органов.

На основании «комбинации» вышеуказанных параметров определяется «группировочная» клиническая стадия заболевания, которая обозначается римскими цифрами от I до IV, где I – самая ранняя, а IV – наиболее распространенная стадия. О IV стадии рака легкого говорят, когда появляются отдаленные метастазы.

Важно! Стадия заболевания устанавливается один раз – в момент первичной диагностики заболевания и не изменяется в последующем. Это означает, что если у пациента со стадией заболевания T1aN0M0 (IA) через несколько лет после лечения появились метастазы в печени, стадия не изменится на IV, а останется прежней.

Для уточнения стадии заболевания и распространенности опухолевого процесса при раке легкого могут быть использованы различные диагностические методы, включая КТ, ПЭТ-КТ, магнитно-резонансную томографию, сцинтиграфию и другие инструментальные обследования. Это необходимо для определения наилучшей тактики дальнейшего лечения.


Уточнение строения опухоли и её особенностей

Перед началом лечения в обязательном порядке должно проводиться гистологическое и молекулярно-генетическое исследование образца опухолевой ткани.

Гистологическое изучение образца ткани: врач-патологоанатом (патолог, патоморфолог) при помощи микроскопа изучает строение срезов опухолевой ткани, которая была получена в ходе биопсии или после проведения хирургического лечения, и определяет её микроскопическое (гистологическое) строение. На этом этапе происходит «разделение» рака легкого на различные варианты: патолог уточняет, имеет опухоль мелкоклеточное или немелкоклеточное строение? Последний вариант, в свою очередь, разделяется на плоскоклеточный подтип, аденокарциному и другие варианты.

При оценке послеоперационного материала патолог также изучает как сильно опухоль успела распространиться – имеется ли вовлечение таких анатомических структур, как кровеносные и лимфатические сосуды, поражены ли лимфатические узлы и т.д. В случае необходимости для более точного определения строения опухолевой ткани и происхождения опухоли может быть назначено иммуногистохимическое исследование.

Молекулярно-генетическое тестирование: за последнее время в лечении рака легкого были достигнуты значительные успехи, связанные с углубленным изучением процессов роста и выживания опухолевых клеток в организме. Был обнаружен ряд «мишеней» (биомаркеров), которые могут быть использованы для так называемой целенаправленной или «таргетной» терапии (подробно обсуждено ниже). При лечении больных раком легкого в настоящее время рекомендуется определять наличие следующих молекулярно-генетических особенностей опухоли:


  • Активирующие мутации в гене EGFR;
  • Структурные перестройки (реарранжировки) в генах ALK и ROS1;
  • Наличие и выраженность выработки (экспрессии) белка PD-L1.
  • Реже используется определение наличия мутаций в генах BRAF, MET, RET, а также HER2.

Проведение дополнительных исследований может потребовать дополнительное время, но неправильное назначение таргетных препаратов может привести к ухудшению результатов лечения и навредить здоровью пациента.

Источник: www.russcpa.ru


Бабиченко И.И., Ковязин В.А.
Новые методы иммуногистохимической диагностики опухолевого роста: Учеб. пособие. – М.: РУДН, 2008. – 109 с.

Экспертное заключение – доктор медицинских наук, профессор кафедры патологической анатомии лечебного факультета РГМУ М.В. Самойлов

Учебное пособие выполнено в рамках инновационной образовательной программы Российского университета дружбы народов, направление «Комплекс экспортоориентированных инновационных образовательных программ по приоритетным направлениям науки и технологий»

Содержание

ОСНОВЫ ИММУНОХИМИИ

Тема № 1. Введение. История развития метода. Основные фундаментальные знания в области иммунохимии

Тема № 2. Методические вопросы проведения иммуногистохимической реакции

Тема № 3. Оценка результатов иммуногистохимической реакции. Положительные и негативные контроли. Возможные проблемы при проведении реакции

ПРИКЛАДНЫЕ ВОПРОСЫ ИММУНОГИСТОХИМИИ

Тема № 4. Значение клеточных белков в оценке гистогенеза опухолей

Тема № 5. Рецепторные белки в неизмененных и опухолевых клетках

Тема № 6. Белки – маркеры клеточного цикла

Тема № 7. Факторы апоптоза и пролиферации
Тема № 8. Белковые молекулы, характеризующие клеточную адгезию

Тема № 9. Иммуногистохимия ангиогенеза

ПРАКТИЧЕСКИЕ ВОПРОСЫ ОНКОМОРФОЛОГИИ

Тема № 10. Иммуногистохимическая характеристика опухолевых клеток. Опухоли из эпителия

Тема № 11. Выявление гистогенетической принадлежности опухолей мезенхимального происхождения

Тема № 12. Дифференциальная диагностика лимфом

ЛИТЕРАТУРА [показать]

ОПИСАНИЕ КУРСА И ПРОГРАММА

ПРАКТИЧЕСКИЕ ВОПРОСЫ ОНКОМОРФОЛОГИИ


В настоящее время иммуногистохимический метод исследования широко применяется для выявления неизвестной локализации первичной опухоли при наличии её метастазов. От 10 до 15% раковых опухолей характеризуются метастазами в различных органах, полостях и лимфатических узлах.

При морфологической диагностике метастатические опухоли, согласно рекомендациям Европейского общества медицинской онкологии (ESMO, 2004), целесообразно разделять на пять крупных категорий: аденокарцинома, плоскоклеточный рак, нейроэндокринный рак, недифференцированный рак, недифференцированная опухоль. Эти морфологические категории наряду с данными о распространённости процесса во многих случаях позволяют определить адекватный план обследования и лечения.

Частота случаев, когда заболевание сопровождалось развитием метастазов, а локализация первичной опухоли на момент морфологического исследования неизвестна, составляет 3-15% от всех онкологических заболеваний. При этом локализация первичного очага определяется при жизни в среднем у 30-40% пациентов, на аутопсии – у 60-70%.

Иммуногистохимическое исследование в зависимости от морфологического типа новообразования позволяет уточнить гистогенез опухоли и/или высказаться о вероятной локализации первичного очага. Большинство из этих опухолей представляют аденокарциномы молочной железы, толстого кишечника, легких, яичников, поджелудочной железы, предстательной железы и желудка.

В случае метастазов аденокарциномы задача иммуногистохимического исследования состоит в выявлении вероятного источника метастазирования.

Для этих целей в настоящее время используется целый ряд маркеров включая цитокератины 7 и 20, тиреоидный фактор транскрипции (TTF-1), CA125, CDX2, рецепторы к эстрогенам, GCDFP-15, лизоцим, мезотелин, простат-специфический антиген.

Цитокератин 7 (CK7) относится к семейству белков промежуточных филаментов, имеет молекулярную массу 54 кДа, выявляется в различных видах железистого эпителия. Антитела клона OV-TL (Dako) окрашивают цитоплазму различных видов клеток нормального и неопластического железистого эпителия, включая эпителий протоков. CK7 выявляется в клетках цилиндрического и железистого эпителия легких, шейки матки, молочной железы, желчевыводящих путей и собирательных трубочек почек. CK7 окрашивает переходный эпителий мочевого пузыря, эпителий яичников и легких. Иногда можно встретить положительное окрашивание эндотелия сосудов. В свою очередь, CK7 не экспрессируется в эпителиальных клетках желудочно-кишечного тракта, предстательной железы. Практически не выявляется CK7 в гепатоцитах, эпителии проксимальных и дистальных извитых канальцев почек, миоэпителиальных клетках, многослойном эпителии кожи, языка, пищевода и эктоцервикса. Моноклональные антитела OV-TL выявляют отдельные виды аденокарцином и могут быть использованы для проведения дифференциальной диагностики между CK7-позитивными тканями (такими как рак яичников и переходноклеточный рак) и CK7-негативными тканями (такими как аденокарциномы желудочно-кишечного тракта и рак предстательной железы).

Цитокератин 20 (CK20) является представителем кератина I типа, который непосредственно экспрессируется в эпителии желудка и тонкого кишечника, уротелии и клетках Меркеля кожи. Антитела (клон Ks 20.8, Dako) реагируют с соответствующим белком молекулярной массой 46 кДа. CK 20 – это основной белок зрелых энтероцитов и бокаловидных клеток; он специфически экспрессируется в эпителиальных клетках слизистой оболочки желудка и тонкого кишечника. Его также можно выявить в аденокарциномах толстого кишечника, желудка, поджелудочной железы, желчных капилляров, в муцинозных опухолях яичников, переходноклеточном раке мочевого пузыря и раке из клеток Меркеля. В свою очередь, в плоскоклеточных раках, аденокарциномах молочной железы, легких, эндометрия, не муцинозных опухолях яичников и мелкоклеточных карциномах легких CK 20 не экспрессируется.

TTF-1 – ядерный фактор транскрипции, представляющий собой гомеодоменный белок семейства NKX2 (молекулярная масса 40 кДа); экспрессируемый эмбриональной и зрелой тканью легкого и щитовидной железы. В ядрах клеток большинства других органов – печени, желудка, поджелудочной железы, тонкого и толстого кишечника, почек, молочной железы, кожи, яичек, гипофиза, предстательной железы и надпочечников данный фактор не содержится. TTF-1 выявлен в первичных легочных аденокарциномах и не экспрессируется в аденокарциномах толстого кишечника и молочной железы. Антитела к TTF-1 являются ценным маркером при дифференциальной диагностике аденокарциномы легких с метастазами рака молочной железы и мезотелиомы. При выявлении аденокарцином легких с помощью TTF-1 окраска является более специфичной, чем при использовании антисурфактантных антител.

Лизоцим катализирует гидролиз отдельных мукополисахаридов клеточной оболочки бактерий. Используется для выявления опухолей из гистиоцитов и лейкозных клеток миелоидного ряда. Он выявлен в клетках селезенки, легких, почек, лейкоцитах крови, плазматических клетках, слюне, молоке и слезной жидкости.

Мезотелин – клеточный гликопротеин (молекулярная масса 40 кДа), располагается на поверхности мезотелиальных клеток и связан с механизмами клеточной адгезии. Он также выявляется в мезотелиомах, эпителиальных раках яичников и некоторых плоскоклеточных раках. Клон 5В2 (Novocastra) окрашивает эпителиоидные мезотелиомы и аденокарциномы легких, яичников, опухоли брюшины, эндометрия, поджелудочной железы, желудка и толстого кишечника. Антитела не реагируют с тканью почек, печени, плаценты, кожи и щитовидной железы. Мезотелина много в обычных мезотелиальных клетках, из которых формируются злокачественные мезотелиомы и цистаденокарциномы яичников. Эти антитела вместе с антителами к калретинину могут быть использованы для выявления мезотелиом.

CDX2 – рекомбинантный белок прокариотов, соответствующий аминокислотному N-терминальному участку молекулы CDX2 человека. Является специфическим транскрипционным фактором клеток тонкого кишечника. Ген cdx2 кодирует интестинально-специфический транскрипционный фактор, его белок экспрессируется на ранних стадиях развития тонкого кишечника и может иметь значение в регулировании пролиферации и дифференцировки эпителиальных клеток тонкого кишечника. Играет важную роль в инициации дифференцировки клеток в зрелые энтероциты. Клон AMT28 (Novocastra) реагирует с 40кДа белком, расположенным в ядрах клеток. Он экспрессируется в ядрах эпителиальных клеток кишечника от двенадцатиперстной кишки до прямой кишки. Белок CDX2 экспрессируется также в первичных и метастатических опухолях толстого кишечника, а также выявляется при кишечной метаплазии желудка и кишечном типе рака желудка, в свою очередь, в нормальных эпителиальных клетках желудка он не встречается. Данный белок обнаруживается в ядрах только цилиндрического эпителия и раковых клетках колоректальных аденокарцином, таким образом с его помощью можно идентифицировать метастазы рака толстого кишечника.

CA125 – белок ракового антигена яичников. Моноклональные антитела (клон Ov185:1, Novocastra) распознают муциноподобный гликопротеин молекулярной массой около 200 кДа. Антитела окрашивают различные опухоли, такие как аденокарциномы толстого кишечника, аденокарциномы молочной железы, опухоли матки, бронхо-альвеолярные раки, эндометриоидные и серозные аденокарциномы яичников.

ER – рецепторы к эстрогенам. Клон 6F11 (Novocastra) взаимодействует с эстрогеновым рецептором альфа. Антитела окрашивают ядра с рецепторами к эстрогенам в эпителиальных и гладкомышечных клетках матки, а также ядра эпителия молочных желез. Выявление рецепторов к стероидным гормонам широко применяется при лечении гормонально-зависимых опухолей. Наличие рецепторов к эстрогенам является маркером рака молочной железы, а также может свидетельствовать о прогнозе заболевания и эффективности эндокринной терапии.

Простат-специфический антиген (ПСА) – представляет собой гликопротеин. Клон ER-PR8 (Dako) получен к белку молекулярной массой 35 кДа. ПСА биохимически и иммуногистохимически отличается от другого широко используемого маркера опухоли предстательной железы – кислой простатической фосфатазы. Он располагается в цитоплазме клеток ацинарного и протокового эпителия нормальной ткани, выявляется при доброкачественной гиперплазии предстательной железы и аденокарциноме. Эти антитела можно использовать для выявления метастазов рака предстательной железы, поскольку ПСА выделяется опухолевыми клетками простаты и определяется в плазме крови у больных с раком простаты.

GCDFP-15 – белок, который встречается при диффузной кистозной мастопатии, для которой характерны макро- и микрокисты, протоковая и дольковая гиперплазия и др. патология молочных желез. Кисты формируются за счет апокриновой секреции эпителиальными клетками. Жидкость кист содержит гликопротеины, включая уникальный 15 кДа мономер. В нормальной ткани подобный белок встречается в эпителии слезных, подъязычных и мелких слюнных желез, в клетках серозных оболочек, трахеальных и бронхиальных желез.

GCDFP-15 и PSA одновременно экспрессируются в опухолях молочных желез с положительной реакцией на рецепторы к андрогенам. Данный маркер может быть использован для выявления аденокарциномы молочной железы, протоковых раков слюнных желез и апокринового эпителия.

Часть маркеров, такие как ПСА для рака предстательной железы, TTF-1 для рака легких, работают моноспецифично. Другая часть маркеров этой панели характерна для нескольких опухолей: так, рецепторы к эстрогенам могут быть выявлены при раке молочной железы или яичников, CDX2 – при опухолях желудочно-кишечного тракта. Часть маркеров может характеризовать источник метастаза только комплексно: рецепторы к эстрогенам, мезотелин и CA125 характеризуют опухоли яичников.

J.L Dennis с соавт. (2005) предложили алгоритм для выявления локализации первичных опухолей по иммуногистохимической характеристике метастазов с использованием данного набора маркеров:

  1. ПСА-позитивные опухоли, как правило, в 99% случаев представляют собой рак предстательной железы.
  2. TTF1-позитивные опухоли, в 98% случаев — рак легких.
  3. GCDFP-15-позитивные опухоли могут быть либо аденокарциномой толстого кишечника, либо аденокарциномой молочной железы. В данном случае для дифференциальной диагностики используется маркер CDX2. Опухоли CDX2(+) составляют аденокарциномы толстого кишечника, CDX2(–) – аденокарциному молочной железы.
  4. Положительная реакция с маркерами CDX2 и CK20 наблюдается в метастазах из опухолей желудка, поджелудочной железы и толстого кишечника. Применение дополнительного маркера CK7 позволяет дифференцировать эти опухоли. CK7(+) характерен для аденокарциномы желудка и поджелудочной железы; CK7(–) – характеризует аденокарциному толстого кишечника.
  5. Рецепторы к эстрогенам встречаются как в опухолях яичников, так и при раке молочной железы. В дифференциальной диагностике этих опухолей помогает маркер мезотелин(+), фенотип характерен для рака яичников; фенотип мезотелин(–) наблюдается при раке молочной железы.
  6. CA125 является маркером аденокарциномы поджелудочной железы.
  7. Мезотелин(+) характерен для опухолей желудка или поджелудочной железы.
  8. Лизоцим(+) выявляет опухоли желудка и поджелудочной железы.

Метастазы плоскоклеточного и нейроэндокринного рака без выявленного
первичного очага (Савелов Н.А., Петровичев Н.Н., 2006)

При метастазах плоскоклеточного рака проводить иммуногистохимическое исследование нецелесообразно, так как возможности метода не позволяют уточнить вероятный источник метастазирования. Это относится и к метастазам низкодифференцированного нейроэндокринного рака. Однако при метастазах высокодифференцированного нейроэндокринного рака (синоним – атипичный карциноид) коэкспрессия CK7 и TTF1 может свидетельствовать о локализации первичного очага в легком, а коэкспрессия CK20 и CDX2 – в органах ЖКТ.

Метастазы недифференцированного рака без выявленного первичного
очага (Савелов Н.А., Петровичев Н.Н., 2006)

У пациентов с метастазами без четких морфологических признаков железистой (аденогенной), нейроэндокринной или плоскоклеточной дифференцировки главной задачей дополнительных методов исследования является уточнение гистогенеза опухоли (точнее, установление направления дифференцировки опухолевых клеток). Для этого применяется следующая панель антител: р63, CК5, CK14 или CК5/CK6, CК18, СD56 (N-CAM).

Антитела к белку Р63 (клон 4А4, Dako). Белок Р63 принадлежит к семейству Р53 опухолевых супрессорных генов, которые также включают белок Р73. Эти белки регулируют процессы клеточной транскрипции и запускают процессы апоптоза в ответ на повреждение ДНК и развитие гипоксии. Р63 экспрессируется в ядрах базальных клеток различных видов эпителия. Белок Р63 выявляется в пролиферирующих клетках эпителия шейки матки, уротелия и предстательной железы. Он также экспрессируется в большинстве низкодифференцированных плоскоклеточных раков. Антитела к Р63 помогают дифференцировать доброкачественные и злокачественные опухоли предстательной железы.

Антитела к белку CD56 (клон МОС-1, Dako). Белок CD56 является антигеном клеток натуральных киллеров. Реагирует с CD4+ и CD8+, Т-клетками в периферической крови. CD56 можно выявить в нейробластоме и мелкоклеточном раке легких, а также некоторых других опухолях.

Цитокератины CK5/CK6 (клон D6/16 B4, Dako). Цитокератины относятся к семейству промежуточных филаментов и выявлены практически во всех клетках. Типы цитокератинов CK5/CK6 выявляются в мезотелиальных клетках и не встречаются в аденокарциномах. CK5/CK6 применяются как маркеры мезотелиомы и плоскоклеточного рака легких, болезни Боуэна (разновидности карциномы, поражающей чешуйчатые клетки эпидермиса кожи, но не распространяющейся на ее базальные слои). Они не встречаются в аденокарциномах легких, но окрашивают мезотелиому и базальные клетки желез простаты. Данные антитела не реагируют с тканями мезодермального происхождения, такими как мышцы и соединительная ткань. Цитокератины CK5/CK6 экспрессируются в низкодифференцированных аденокарциномах и выявляются в эпителиоидных мезотелиомах.

Цитокератин CK14 (клон LL002, BioGenex), молекулярная масса 50 кДа, – это кислый цитокератин первого типа, с помощью которого можно отличить многослойный плоский эпителий от простого эпителия. Цитокератин CK14 равномерно экспрессируется в цитоплазме всех клеток многослойного плоского ороговевающего эпителия. Моноклональные антитела к цитокератину CK14 помогают дифференцировать типы клеток в молочных железах при развитии аденокарциномы.

Цитокератин CK18 (клон DC10, Dako) – белок с молекулярной массой 45 кДа. Антитела реагируют с большинством видов простого эпителия, включая эпителий протоков и ацинусов желез. Данный белок экспрессируется в эпителии щитовидной железы, молочной железы, желудочно-кишечного тракта и дыхательной системы. Антитела используют для выявления аденокарцином легких, при этом они окрашивают цитоплазму опухолевых клеток из эпителия и не окрашивают опухолевые неэпителиальные клетки (глиомы, меланомы, остеосаркомы).

Для дифференциальной диагностики низкодифференцированных опухолей используется следующий алгоритм:

  1. СК18(+) – аденокарцинома;
  2. СК5/14(+) и р63(+) – плоскоклеточный рак;
  3. СК5/CK14(+), СК18(+), р63(+) – переходноклеточный рак, плоскоклеточный рак, тимома;
  4. СК18(+), CD56(+) – нейроэндокринный рак.
  5. При выявлении экспрессии СК5/14, СК18 и р63 дифференцировать переходноклеточный рак от плоскоклеточного в ряде случаев возможно, исследуя коэкспрессию СК7 и СК20, которая наблюдается приблизительно в 60% метастазов переходноклеточного рака.

Источник: bono-esse.ru

Какие задачи в онкологии помогает решать иммуногистохимия?

Иммуногистохимический анализ помогает врачам-онкологам:

  • Отнести злокачественную опухоль к тому или иному типу.
  • Выяснить, в каких генах опухолевых клеток произошли мутации, какие белки способствуют прогрессированию рака.
  • Выявить первичную опухоль и ее метастазы.
  • Определить, произошла ли злокачественная трансформация клеток.
  • Определить прогноз для пациента.
  • Разобраться, поможет ли в данном случае таргетная терапия.
  • Определить, чувствительны ли опухолевые клетки к химиотерапии, лучевой терапии.

Как это работает?

Игх при раке легкого

Иммуногистохимия бывает прямой и непрямой. В первом случае используют один вид антител, которые должны вступить в связь с определенной молекулой-мишенью. Если молекула-мишень присутствует в ткани, и реакция произошла, опухолевая ткань окрашивается:

  • Чаще всего к антителу присоединяют фермент, например, пероксидазу. Этот фермент катализирует химическую реакцию, которая приводит к изменению цвета.
  • Иногда к антителу присоединяют флюоресцин или родамин, при этом окрашивание выявляют с помощью флюоресцентной микроскопии.
  • всего применяют непрямую иммуногистохимию. При этом используют два антитела. Одно соединяется с антигеном, второе — с полученным комплексом антиген-антитело. Маркер, который вызовет изменение цвета, связывают со вторым антителом.

Непрямой метод имеет некоторые преимущества:

  • Он обладает более высокой чувствительностью, потому что с одним первичным антителом (тем, которое связывается с белком-мишенью) может связаться несколько вторичных антител.
  • Исследование занимает немного времени: для того, чтобы произошла реакция, нужно примерно 3 часа.
  • Непрямая иммуногистохимия требует небольшого количества антител. Например, вторичное антитело, направленное на иммуноглобулины кролика, будет реагировать на любое первичное антитело «кроличьего» происхождения. Не нужно создавать много разных видов вторичных антител с окрашивающей или флуоресцентной меткой.

Как проводят исследование?

Для того чтобы выполнить иммуногистохимический анализ, нужно получить опухолевую ткань, то есть провести биопсию. В качестве материала можно использовать столбик ткани, полученный во время трепан-биопсии, фрагмент тканей или даже целый орган, удаленный во время операции.

Игх при раке легкого

Образец ткани фиксируют с помощью формальдегида (иногда используют метанол, ацетон и другие фиксаторы — это зависит от того, какой антиген нужно выявить, и реагирует ли он с теми или иными фиксаторами) и погружают в парафин. Парафинизация помогает законсервировать ткань, сохранить ее структуру на длительное время.

Затем ткань, помещенную в парафин, нарезают с помощью специального инструмента — микротома — на слои толщиной 3–5 мкм. Эти тонкие срезы помещают на стекло, покрытое, специальным клеем.

Некоторые образцы слишком чувствительны к реагентам, которые применяют во время вышеописанной процедуры. Их нельзя помещать в парафин. Такие ткани замораживают жидким азотом. Этим альтернативным методом пользуются редко, только в случае необходимости, так как у заморозки есть некоторые недостатки: она делает изображение под микроскопом не таким четким, требует специальных условий хранения образцов. Фиксацию ткани в таких случаях проводят уже после нанесения на стекло и размораживания, ацетоном или формальдегидом.

После того как срезы нанесены на стекло, из них нужно удалить весь парафин, иначе антитела не прореагируют с антигеном. Эта процедура называется депарафинизацией. Ее проводят с помощью ксилола. Затем выполняют еще некоторые подготовительные процедуры, чтобы антитела могли успешно прореагировать с нужными антигенами, и, наконец, проводят непосредственно иммуногистохимический анализ. Обработанную антителами ткань рассматривают под микроскопом, чтобы проверить, окрасилась ли она.

Какие молекулы-мишени выявляют во время иммуногистохимии?

Количество возможных мишеней измеряется сотнями. Перед исследованием врач должен понимать, что он ищет, и использовать соответствующие антитела. В онкологии мишенями являются опухолевые маркеры — вещества, которые в здоровых клетках отсутствуют вообще или присутствуют в значительно меньшем количестве. Вот некоторые примеры:

  • Рецепторы к эстрогенам и прогестерону помогают идентифицировать гормонально-позитивный рак молочной железы и разобраться, помогут ли женщине гормональные препараты.
  • Простатспецифический антиген (ПСА) имеет значение в диагностике рака простаты.
  • Альфа-фетопротеин — присутствует в гепатоцеллюлярной карциноме (рак печени).
  • Цитокератины помогают в диагностике рака и некоторых сарком (злокачественных опухолей соединительной ткани).
  • Фермент CD10 (CALLA) связан с карциномой почек, лимфобластным лейкозом.

Игх при раке легкого

Какова роль иммуногистохимии в современной онкологии?

Иммуногистохимический анализ помогает изучить характеристики злокачественной опухоли, которые не могут выявить другие методы диагностики. Зачастую это играет важную роль в уточнении диагноза и назначении правильного лечения. Врач может определить, какие комбинации препаратов будут наиболее эффективны для конкретного больного, иными словами, реализуется принцип персонализированного лечения. Зачастую это помогает улучшить результаты, подобрать эффективное лечение для пациентов, которым не помогает стандартная терапия.

Источник: www.euroonco.ru

Иммуногистохимия рака легкого

Иммуногистохимия представляет собой инновационный метод морфологической диагностики раковых заболеваний. Суть исследования заключается в лабораторном изучении образцов опухолевой ткани, полученной во время биопсии, после их предварительной обработки специальными антителами. Данный метод НЕ ИМЕЕТ противопоказаний, поэтому не может быть выполнен только при невозможности проведения биопсии.
Патогенные клетки продуцируют характерные определенной раковой опухоли специфические белки, называемые антигенами, которые способны взаимодействовать с некоторыми антителами. При проведении иммуногистохимии рака легкого полученный образец опухолевой ткани подвергается обработке определенными антителами, а затем изучается в лаборатории. В результате обработки вещества, связывающиеся с бластными клетками, начинают светиться, что позволяет выявить наличие аномальных клеток.

Показания к иммуногистохимии

Метод исследования позволяет исследовать любые ткани, поэтому часто выполняется при подозрении опухолевого процесса.
Исследование может быть выполнено с различными целями:

  • Определить тип и подтип злокачественной опухоли,
  • Выявить источник метастазов,
  • Определить распространенность опухолевого очага,
  • Оценить эффективность терапии рака,
  • Определить степень онкологии,
  • Оценить скорость роста новообразования,
  • Определить прогноз болезни.

Результаты исследования позволяют осуществлять высокоэффективное лечение с помощью современных противоопухолевых препаратов, подавляющих пролиферацию раковых клеток.

Как выполняется иммуногистохимия рака легкого

Обследование включает четыре основные этапы.
Первый этап предполагает взятие образца опухолевой ткани во время биопсии либо во время оперативного вмешательства. Выбор метода забора биоптата (опухолевой ткани) зависит от места нахождения злокачественного новообразования. После взятия материала его помещают в раствор формалина (как правило, 10%-й) и передают в лабораторию.
На следующем этапе проводится обработка материала исследования, при которой лаборант делает тончайшие срезы биоптата и помещает их на гистологические стекла.
Третий этап иммуногистохимии предполагает окрашивание полученных срезов специальными препаратами – растворами специфических антител. После каждого этапа окрашивания материалы изучаются врачом, принимающим решение о необходимости продолжения поиска опухолевых маркеров либо о постановке диагноза. Окрашивание срезов выполняется вручную лаборантом, либо автоматически с помощью медицинского оборудования. Второй способ является более достоверным и исключает ошибки.
Количество используемых маркеров может отличаться в зависимости от конкретного клинического случая и, как правило, зависит от предварительного диагноза. Исследование предполагает использование малой панели (до 5 антител) либо большой (от 6 единиц до десятков антител). Результаты исследования при стандартной «малой панели» пациент получает через неделю, в случае использования «большой панели» ждать приходится около двух недель.

Результаты исследования

Изучение полученных данных проводит патологоанатом. В заключение процедуры специалист нашего Специализированного Онкоцентра отмечает реагенты, с которыми было определено сродство ткани, также описывается морфологическая картина биоптата: выявленный тип бластных клеток и их количество. Сродство биопсийного материала и используемых опухолевых антител указывает на конкретный тип раковой опухоли.
Иммуногистохимия рака легкого считается наиболее достоверным и точным методом исследования онкологии, позволяющим почти со 100% точностью поставить диагноз, определить тип новообразования и выявить место локализации опухоли.

Особенности иммуногистохимии

Характерным отличием данного исследования от других диагностических процедур, в основе которых также заложена реакция антиген-антител, считается структурная специфика проведения обследования. В процессе диагностики врач изучает наличие реакции, а также ее интенсивность и распространение сигнала в биоптате.

Реагенты для иммуногистохимии рака легкого

  • Adrenocorticotropin (ACTH)
  • BCA-225
  • Carcinoembryonic Antigen (CEA)
  • p53
  • CONFIRM CD15
  • CD57
  • Neurofilament
  • CONFIRM Chromogranin A
  • COX-2 (Cyclooxygenase 2)
  • TAG-72
  • Human Chorionic Gonadotropin (hCG)
  • CONFIRM Cytokeratin
  • Cytokeratin 5 & 6
  • CONFIRM EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor)
  • CONFIRM EGFR (Epidermal Growth Factor Receptor)
  • CONFIRM Synaptophysin
  • CONFIRM IGF-1 Receptor
  • NSE (Neuron Specific Enolase)
  • p27kip1
  • CONFIRM p53
  • Podoplanin
  • CONFIRM Thyroid Transcription Factor-1 (TTF-1)
  • WT1

Источник: www.rak-legkih.ru


Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

*

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте, как обрабатываются ваши данные комментариев.