Иммуногистохимическое обследование


Поставить точно диагноз «онкология» без проведения специальных исследований практически невозможно. В настоящее время медицина обладает такими возможностями. Поэтому если имеется подозрение на рак, то проводится иммуногистохимическое исследование. Рассмотрим, что собой представляет данный анализ, в каких случаях назначается и что позволяет выявить.

Сущность исследования

Под данным исследованием подразумевается изучение образца тканей под микроскопом. Их получают при помощи биопсии и предварительно обрабатывают специфическими антителами.

Онкологические заболевания давно находятся в поле зрения врачей и ученых. В ходе многочисленных исследований было установлено, что злокачественные клетки в процессе жизнедеятельности продуцируют специфические белки, которые называют антигенами. Они связываются с антителами, именно на этом основано иммуногистохимическое исследование, когда ткань пациента, взятая для изучения, после обработки тщательно изучается при помощи микроскопии.

Когда антитела взаимодействуют с раковыми клетками, то можно наблюдать явление флуоресценции. Это дает основания практически на 100 % быть уверенным, что имеет место онкология.

Сейчас уже разработаны и активно внедрены в медицинскую практику антитела практически ко всем новообразованиям.

Возможности исследования

Иммуногистохимическое исследование при раке позволяет:


  • Распознать новообразование и определить его разновидность.
  • Выяснить распространенность первичного очага по организму.
  • При взятии биологического материала из вторичных очагов можно определить источник распространения метастазов.
  • Исследование позволяет оценить эффективность терапии.
  • При помощи анализа можно выяснить, на какой стадии развития находится раковая опухоль.
  • Иммуногистохимическое исследование позволяет также выяснить скорость роста новообразований.

Данный метод исследования считается более информативным по сравнению с обычным гистологическим. Если использовать оба метода исследования, то можно получить полнейшую картину, поэтому на практике чаще всего врачи так и поступают.

Показания к проведению исследования

Исследовать при помощи этого метода можно практически все ткани человеческого организма, но чаще всего такой анализ назначают при подозрении на онкологию.

Исследование применяют:

  1. Для определения первичных новообразований.
  2. Для выявления метастазов.
  3. Данный анализ помогает определить прогноз развития и протекания патологии.
  4. Анализ служит одним из методов исследования рецепторов к ряду гормонов.
  5. ИГХ-исследование позволяет обнаружить микроорганизмы.
  6. Метод исследования применяют для выяснения чувствительности раковых клеток к химиотерапии и радиотерапии.

Преимуществом такого метода исследования является также отсутствие противопоказаний. Сложность может возникнуть только в том случае, если раковое образование расположено в труднодоступном месте.

Методика проведения анализа

Иммуногистохимическое исследование проводится в несколько этапов, первым из них является сбор биологического материала. Его получают путем биопсии или изъятия материала во время проведения операции.

Кусочек ткани помещают в формалин и направляют в лабораторию, где его подвергают изменениям:

  1. Материал обезжиривают специальными составами и заливают парафином. В таком состоянии он может храниться практически вечно, поэтому при необходимости исследование можно повторять.
  2. На следующем этапе получают тончайшие срезы — проводят микротомирование. Их размещают на специальных стеклах.
  3. Приготовленные срезы обрабатывают растворами антител определенной концентрации. Использовать для обработки могут составы, содержащие разное количество антител. Какие из них вступят во взаимодействие с раковыми клетками, будет зависеть от разновидности опухоли.

Результаты исследования будут готовы только через одну или две недели.

Иммуногистохимическое исследование при раке молочной железы


Такой анализ просто незаменим, если есть подозрение на наличие раковых клеток в груди. Обязательно определение количества рецепторов эстрогена и прогестерона. При их повышении активизируется процесс роста злокачественных клеток.

ИГХ-исследование позволяет не только распознать онкологическое заболевание, но и определить его стадию. При помощи исследования врачи выясняют, показана ли гормональная терапия.

Опухоли, имеющие большую концентрацию гормонов, чаще всего вполне эффективно лечатся антигормональными препаратами.

Во время проведения анализа обязательно определяют показатель Ki-67, он помогает определить злокачественность процесса. Если иммуногистохимическое исследование молочной железы показывает Ki-67 до 15 %, то исход заболевания считается благоприятным. Если показатель доходит до 30 %, то без химиотерапии не обойтись, потому что опухоль растет довольно быстро. Отметка в 90 % чаще всего свидетельствует о неизбежности летального исхода.

Данный анализ назначается не только при подозрении на онкологию груди, но еще он оказывается довольно информативным, если:

  • Имеется бесплодие.
  • Обнаружены злокачественные образования матки.
  • Наблюдаются патологические изменения в репродуктивной системе.

Иммуногистохимическое исследование эндометрия

Такой анализ проводится, если:

  • Часто наблюдаются выкидыши.
  • У женщины было несколько неудачных попыток ЭКО.
  • Диагностирована хроническая форма эндометрита.

Данное исследование помогает выяснить, имеются ли клетки, мешающие зачатию естественным путем.

ИГХ-исследование тканей эндометрия назначается женщинам, у которых уже было несколько неудачных попыток искусственного оплодотворения.

Взятие тканей эндометрия проводится в разные дни цикла, которые назначает врач.

Интерпретация результатов анализа

Необходимо иметь в виду, что исследовать подготовленные образцы тканей имеет право только врач, имеющий сертификат, подтверждающий специальную подготовку по проведению анализов по методу ИГХ.

В заключении должно быть указано:

  1. Показатели антител, к которым определена тропность исследуемой ткани.
  2. Указывается разновидность раковых клеток и их количество.
  3. Указываются выявленные антигены, которые помогают установить вид онкологии.

По результатам исследования нельзя ставить окончательный диагноз. Врач-онколог имеет право это сделать только после получения интерпретации всех диагностических процедур.

Таким образом, можно сделать вывод, что эффективно иммуногистохимическое исследование при раке молочной или других желез и других видах онкологии. Анализ дает исчерпывающую информацию и позволяет распознать начинающийся патологический процесс на клеточном уровне.

Источник: www.syl.ru

Как работает метод


В названии метода соединились три отрасли – иммунология, гистология и химия. Для анализа используют химические вещества. Реактивы насыщены антителами, находящими раковые антигены. Антитело – это белок, его структура притягивает антиген. Белок окрашивают ферментами, красителями, которые проявляются при положительной реакции.

Теоретические основы иммуногистохимии заложены в 40-е годы 20-го века. С помощью флуоресценции находили антигены в замороженных клетках. Затем стали использовать окрашенные ферментами антитела. Установили соответствия цветовой реакции и типа раковых клеток. Также определили гормоны и их рецепторы.

Практическое применение методов ИГХ:

  • Определение типа клеток;
  • Изучение секреторных внутриклеточных процессов и особенностей клеточного синтеза;
  • Определение гормонов и гормональных рецепторов.

Виды:

  • Прямой метод – маркированные антитела соединяются с искомыми антигенами.
  • Непрямой, «антиген-антитело» – неотмеченные антитела находят антигены, потом их соединения обнаруживают вторичные отмеченные антитела.

Цвет реакции показывает статус опухоли.

Цель метода

Иммуногистохимическое исследование отвечает на три вопроса.

Что это такое

Специфический анализ помогает выяснить строение раковой клетки и идентифицировать по гистологическим признакам, к какому классу относится новообразование.


Где оно находится

Если точная локализация опухоли неизвестна, с помощью иммуногистохимии находят расположение по метастазу.

Как это лечить

С помощью анализа видна реакция антигенов на вещества препаратов химиотерапии. Так удаётся оценить, окажется ли действенным лечение указанным способом. Установить, к каким препаратам рак устойчив, можно прежде, чем химия попадет в организм человека. Таким образом, пациента избавляют от лишней интоксикации, а сразу назначают лекарство, о действенности которого заведомо известно. Если рак устойчив к химиотерапии, предстоит выбрать другой метод лечения.

Это помогает в лечении эстрогенозависимых опухолей при раке молочной железы.

Иммуногистохимическое обследование

Сложная структура железистых клеток включает признаки новообразований различной степени агрессивности. Эти опухоли бывают устойчивыми к химиотерапии и гормонам. Насколько агрессивно развивается опухоль, возможно установить по маркеру пролиферации в иммуногистохимическом тесте.

Как проходит процедура

На иммуногистохимический анализ попадает образец ткани, взятый с помощью биопсии. Это способ забора биоматериала с помощью тонкой иглы. Её вводят в тело пациента и шприц-системой втягивают ткань опухоли. Образец проходит подготовку:

  • Фиксация с помощью парафина.
  • Изготовление срезов.
  • Распределение срезов по стеклам.
  • Обработка образцов антителами и красителями.

Перед исследованием биоматериал хранится в формалине. Это позволяет использовать единственный образец долгое время, чтобы не травмировать пациента. Биопсия бывает болезненна, если опухоли расположены в труднодоступных местах. Злокачественные образования в головном мозге по возможности удаляют оперативно, на анализ попадает непосредственно опухоль. Важно сохранить материал, так как опухоли бывают размером до 1 см. По результатам теста строится программа лечения. Впрочем, в этом случае иммуногистохимия обладает преимуществом.

Положительные и отрицательные стороны

Преимущества метода:

  • Требуется минимум биоматериала и реактивов;
  • Определяет рак на ранней стадии;
  • Быстрый результат;
  • Точность и достоверность.

Дополнительное преимущество – в возможности трехмерного моделирования. Ответная реакция на антитела видна через три часа. Окончательное заключение дается через 7-10 дней. По истечении этого времени будет точно установлен тип рака и стадия заболевания, а также его первичный очаг. Изменение цвета маркеров обычно не имеет разночтений при постановке диагноза. На итоговом бланке прописывают расшифровку результатов.

Достоверность зависит от метода окрашивания образца реактивами. Это делается автоматически и вручную. При ручном методе не исключён человеческий фактор, ошибки лаборантов. Лечащий врач подскажет, в какую лабораторию обратиться. Пациент может самостоятельно поинтересоваться, как проводится анализ в конкретном учреждении. Для достоверности результата он может проводиться повторно или в двух лабораториях.

Погрешность в результате возникает по вине пациента. Перед биопсией следует отказаться от гормональных препаратов и других лекарств, от физических нагрузок, придерживаться диеты. Внешние факторы влияют на результаты.


Иммуногистохимическое обследование

Применение метода в диагностике

Показания к анализу:

  • Патологии репродуктивной системы, бесплодие;
  • Активный опухолевый рост любой локализации.

Противопоказаний к анализу нет. Порой невозможно получить биоматериал для исследования из-за расположения опухоли.

Иммуногистохимия эндометрия – важное исследование для нахождения причин бесплодия. Его цель – найти антиспермальные клетки, препятствующие оплодотворению. Причиной бесплодия становится нечувствительность эндометрия к гормонам во время овуляции. При этом показатели гормонального фона в норме, антиспермальных тел нет. Иммуногистохимическая диагностика выявляет, что проблема в рецепторах эндометрия.

Трудно поддаются диагностике тимомы. Их деление на злокачественные и доброкачественные условно. Всё зависит от конкретного случая. Статус опухоли вилочковой железы, тимуса показывает исследование на антитела.

ИГХ при раке прямой кишки применяется, чтобы установить эпителиальный или эндокринный характер опухоли, наследственный фактор и прогноз. Методика определяет первичное ли заболевание и метастазы.


Расшифровка результатов основана на показателе степени злокачественности. Чем он выше, тем менее благоприятный прогноз. Патология – 85% содержания маркера, означает последнюю стадию заболевания с метастазами. Менее 10% – норма, благополучный исход лечения.

Другие маркерные методы

Онкологический диагноз всё же редко ставят по результатам единственного исследования.

Гистологический

Второй информативный анализ – гистология. Метод отличается от иммуногистохимии тем, что даёт представление только о клеточном строении. Гистологическим способом выделяют в одном материале несколько различных структур, к примеру, аденокарциномы. Злокачественное образование формируется из железистой ткани, которое выделяет жидкость. Исходя из типа жидкости, выделяют серозную и слизисто-секреторную. Клетки аденокарцином располагаются фолликулярно или папиллярно. Опухоль бывает твердой или с включениями цист, и уже классифицируется как цистаденокарцинома. Об этих характеристиках узнают по результатам гистологического исследования и корректируют лечение под конкретный тип опухоли.

Технология такая же, как при иммуногистохимии. Берут материал с помощью биопсии, покрывают парафином и разрезают образец на тонкие пластины. Готовые препараты также окрашивают, после чего патоморфолог изучает их под микроскопом.


Недостатки гистологического исследования – длительные сроки ожидания результата планового анализа, 10-14 дней. Срочный анализ делают за 30 мин.

Метод МГМ

Ещё один анализ, в основе которого лежит реакция на маркеры – молекулярно-генетический. Помогает установить отклонения в ДНК злокачественной опухоли, влияющие на её метастатическую и инвазивную активность, а также наличие наследственной предрасположенности или спорадической, спонтанной природы образования.

Гистология и иммуногистохимия – два основных метода постановки диагноза при раке, подтверждающие друг друга. Разница в результатах редка, так как иммуногистохимия включает исследование клеточного строения.

Часто после гистологического исследования лимфоузла пациента дополнительно направляют на иммуногистохимию. Под микроскопом материал изучает эксперт, который может что-то упустить. Либо структуру сложно идентифицировать. Метод ИГХ – помощь в спорной ситуации.

Источник: onko.guru

Исследование клеток ткани, которое проводится с помощью специальных реактивов. 

Синонимы русские

ИГХ, иммуногистохимия, иммуногистохимический анализ.

Синонимы английские

Immunohistochemistry, IHС, immunohistochemical analysis.

Метод исследования

Иммуногистохимический метод.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Образец ткани / образец ткани в парафиновом блоке.

Как правильно подготовиться к исследованию?

  • Специальной подготовки не требуется.

Общая информация об исследовании

Иммуногистохимическое исследование клинического материала проводится в целях выявления в нем искомых веществ. Готовые гистологические препараты обрабатываются специальными реактивами, содержащими меченые специфические антитела к выявляемому веществу, которое в данной ситуации служит антигеном. Если искомое вещество находится в исследуемом материале, то антитело связывается с его определенными участками. В результате этого между ними образуется комплекс и происходит окрашивание ткани.

Данный метод используется в диагностике различных патологических состояний, особенно велика его роль в области онкологии. Иммуногистохимическое (ИГХ) исследование помогает не только диагностировать опухоль, определить ее нозологический вариант, выявить первичный опухолевый очаг и обнаружить раковое перерождение клеток, но также спрогнозировать варианты течения заболевания и успешность лечения. К факторам, влияющим на прогноз, относятся рецепторы к эстрогенам и к прогестерону, Ki-67 (маркер активности опухоли), her-2 neu (эпидермальный фактор роста, определяет чувствительность опухоли к химиопрепарату трастузумабу/герцептину), VEGF (сосудистый фактор роста), Bcl-2, р53 и др. В отличие от иммуногистохимического анализа, их невозможно определить при обычном гистологическом исследовании.

Также этот метод нашел применение в диагностике системных заболеваний соединительной ткани и болезней почек, позволяет выявлять бактерии и вирусы в изучаемых тканях, например вирус Эпштейна — Барр, папиллома-вирус, Helicobacter Pylori (у больных хроническим гастритом), микобактерии при диагностике туберкулеза и др.

На основе ИГХ-анализа врач получает заключение с положительными и отрицательными маркерами, и это помогает подтвердить или опровергнуть гипотезу других клинико-лабораторных исследований.

Рак шейки матки относится к наиболее распространенным видам рака у женщин. Эпидемиологические и лабораторные данные подтверждают роль человеческого папиллома-вируса (ВПЧ, HPV) в качестве запускающего агента для подавляющего большинства предраковых и злокачественных поражений эпителия слизистой оболочки шейки матки. При этом ДНК ВПЧ могут быть обнаружены в 95-100% всех случаев.

Вирус папилломы человека представляет собой небольшие циркулярные двухцепочечные вирусы дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК), принадлежащие к семейству Papillomaviridae. Известно более 130 типов ВПЧ. Они классифицируются по степени риска, основанного на их связи с цервикальной карциномой. ВПЧ 16 и 18 являются наиболее часто встречающимися типами высокого риска. Внедряясь в эпителиальные клетки, вирус вызывает в них дефекты генов, тем самым способствуя развитию опухоли. При помощи ИХГ легко обнаружить в клетках, пораженных HPV, экспрессию белков p16 и p18, и их позитивность сильно коррелирует с позитивностью HPV. Это помогает различить неопухолевую дисплазию (как результат воспаления) и опухолевую (вызванную вирусом папилломы и способную переродиться в рак), а также позволяет провести дифференциальную диагностику дисплазии умеренной и высокой степени тяжести (CIN II/III) и начальных форм рака шейки матки, выявление поражений, склонных к прогрессированию и развитию инвазивной карциномы. В дисплазиях умеренной и высокой степени (в 80-100% случаев CIN II и практически во всех случаях CIN III) и инвазивном раке шейки матки определяется усиленная экспрессия белка p16, и она усиливается по мере нарастания тяжести поражения.

У женщин с плоскоклеточными интраэпителиальными поражениями низкой степени тяжести очаговая и диффузная экспрессия свидетельствует о прогрессировании заболевания. Отсутствие или очаговая экспрессия p16 в поражениях высокой степени может служить дополнительным признаком благоприятного течения патологического процесса.

Применяется иммуногистохимическое исследование и при дифференциальной диагностике целиакии.

Целиакия – это системное заболевание, обусловленное генетической непереносимостью глютена или соответствующих проламинов, которые содержатся в семенах злаков. Характеризуется данная патология повреждением слизистой оболочки тонкой кишки (развитием атрофической энтеропатии), появлением в сыворотке крови специфических антител и широким спектром глютензависимых клинических проявлений. Заболевание встречается в два раза чаще среди женщин, чем среди мужчин, может впервые проявиться как в детстве, так и у взрослых. Целиакия может протекать с ярко выраженной или со стертой клинической картиной, а также без гастроэнтерологической симптоматики. Чаще всего встречается стертый вариант течения заболевания, поэтому диагностика глютеновой энтеропатии (ГЭ) затруднена.
На первичном лабораторном этапе проводится серологическое исследование, определяющее в крови специфические биомаркеры. Лицам с положительными результатами показана эндоскопия тонкой кишки с биопсией и последующим гистологическим и ИГХ анализом взятого материала.

Известно, что целиакия сопровождается повышением числа лимфоцитов внутри эпителиальных клеток тонкой кишки. При этом отличительной особенностью является то, что большинство интраэпитиальных лимфоцитов (ИЭЛ) несут на своей поверхности специфический Т-клеточный рецептор (CD3 γ и CD3δ-положительные клетки). Чем активнее протекает заболевание, тем больше ИЭЛ. Эта особенность используется при проведении иммуногистохимического исследования, позволяющего определить преобладающий тип лимфоцитов. Особенно важен этот анализ, когда существует расхождение между данными серологического исследования и гистологической оценкой на стандартных участках.

Для чего используется исследование?

  • Для определения вида и подвида опухоли, степени ее злокачественности и распространенности онкологического процесса;
  • для дифференциальной диагностики пролиферативных заболеваний;
  • для определения этиологического фактора, вызвавшего изменения в клетках;
  • для подбора эффективной терапии;
  • для оценки пролиферативной активности клеток опухоли;
  • для оценки эффективности лечения;
  • для диагностики рецепторного статуса при онкологическом заболевании (например, раке молочной железы, предстательной железы);
  • для определения первичного очага опухоли;
  • для выявления злокачественного потенциала пораженных клеток;
  • для первичного отбора пациентов для диспансерного учета и дальнейшего обследования;

Когда назначается исследование?

  • При дифференциальной диагностике дисплазии (высокой и умеренной степени) и начальной стадии рака шейки матки;
  • при раке молочной железы, желудка, предстательной железы в целях определения чувствительности к различным видам терапии;
  • при определении степени злокачественности и оценки прогноза заболевания;
  • при оценке эффективности терапии;
  • при поиске источника метастазов;
  • при диагностике гастроинтестинальных стромальных опухолей (GIST) с помощью расширенной панели антител, включающей DOG1;
  • при диагностике нейроэндокринных опухолей;
  • при дифференциальной диагностике целиакии, сопровождающейся неясной гистологической картиной;
  • при расхождении результатов серологического исследования и гистологической оценки.

Что означают результаты?

Референсные значения

Диапазон значений индивидуален для каждого заболевания, зависит от используемых антител.

Расшифровка результатов исследования содержит информацию для лечащего врача и не является диагнозом.

Проводится морфологическая оценка препарата (опухоли классифицируются согласно ВОЗ), дается описательный ответ с указанием оценки экспрессии антитела. ИХГ всегда следует использовать в качестве дополнения к морфологическому исследованию, результаты не следует интерпретировать изолированно.

Что может влиять на результат?

При некоторых заболеваниях есть факторы, которые могут влиять на результат. Так, при диагностике целиакии назначение безглютеновой диеты до исследования может приводить к получению ложноотрицательного результата.

Также рекомендуется

  • [12-006] Цитологическое исследование пунктатов, соскобов других органов и тканей
  • [12-015] Гистологическое исследование биоптатов органов и тканей (за исключением печени, почек, предстательной железы, лимфатических узлов)
  • [12-026] Консультация биопсийного (операционного) материала любой сложности (по готовому материалу)
  • [12-059] Дополнительное изготовление микропрепаратов
  • [12-071] Гистологическое исследование биопсийного материала
  • [13-033] Антитела к тканевой трансглутаминазе, IgG
  • [13-034] Антитела к тканевой трансглутаминазе, IgA
  • [40-156] Целиакия. Скрининг при селективном дефиците IgA
  • [13-017] Антитела к глиадину, IgA
  • [13-018] Антитела к глиадину, IgG
  • [13-032] Антитела к эндомизию, IgA
  • [13-035] Антиретикулиновые антитела (APA)
  • [13-078] Целиакия. Скрининг (взрослые и дети старше 2 лет)
  • [18-086] Диагностика целиакии (типирование HLA DQ2/DQ8)
  • [12-001] Цитологическое исследование мазков (соскобов) с поверхности шейки матки (наружного маточного зева) и цервикального канала на атипию
  • [08-042] Раковый эмбриональный антиген (РЭА)
  • [12-037] Иммуноцитохимическое исследование соскобов шейки матки с определением белка р16
  • [40-528] Скрининг рака шейки матки (цитологическое исследование клинического материала методом жидкостной цитологии c ВПЧ-тестом (Roche Cobas4800)
  • [12-051] Жидкостная цитология. Исследование соскоба шейки матки и цервикального канала (окрашивание по Папаниколау)

Кто назначает исследование?

Онколог, гинеколог, гастроэнтеролог, терапевт, педиатр.

Литература

  • Далленбах-Хеллвег Г., Трунк М.Й., Кнебель Дебериц М. Традиционные и новые молекулярные методы для ранней детекции рака шейки матки//Архив патологии 2004 — №5 — с. 35-39.
  • Brunner M, Koperek O, Wrba F, Erovic BM, Heiduschka G, Schoppper C, et al. HPV infection and p16 expression in carcinomas of the minor salivary glands. Eur Arch Otorhinolaryngol. 2012;269:2265–9.
  • Galgano MT, Castle PE, Atkins KA, Brix WK, Nassau SR, Stoler MH. Using biomarkers as objective standards in the diagnosis of cervical biopsies. Am J Surg Pathol. 2010;34:1077–87.
  • McCluggage WG. Immunohistochemistry as a diagnostic aid in cervical pathology. Pathology. 2007;39(1):97–111.

Источник: helix.ru


Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

*

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте, как обрабатываются ваши данные комментариев.