Игх исследование сколько ждать результат


Иммуногистохимическое исследование в онкологии – это разновидность исследования ткани с помощью специальных реактивов по принципу антиген-антитело.

При иммуногистохимическом исследовании используются реактивы, которые содержат антитела, отмеченные специальными веществами.

Антитело – это белок, который связывается в тканях с определенными молекулами — антигенами, после чего возникает реакция. Если же таких молекул нет, то и реакции не будет.

По этому признаку можно судить, присутствует в ткани интересная нам молекула или нет. Это похоже на то, если нанести на белый стол бесцветный клей. Невооруженным глазом на белом фоне он практически незаметен, но стоит насыпать на стол мелкого песка, как клей становится виден за счет прилипших песчинок.

Игх исследование сколько ждать результат    Игх исследование сколько ждать результат

По правилам иммуногистохимическое исследование при раке всегда проводится в специализированной лаборатории. Для его проведения необходима опухолевая ткань, полученная в результате биопсии или операции.


Иммуногистохимическое исследование проводится для определения наличия в опухолевых клетках различных точек приложения, например, наличие рецепторов эстрогенов (ER) и прогестеронов (PR). Также иммуногистохимия выполняется для определения показателя Ki-67 (индекс пролиферативной активности опухолевых клеток), гиперэкспрессии белка Her2neu, VEGF (сосудистый фактор роста), р53.

Иммуногистохимическое исследование при раке выполняется для того, чтобы понять, какими препаратами можно лечить злокачественную опухоль, и к каким видам препаратов она чувствительна.

Самый распространённый анализ, определяемый при иммуногистохимическом исследовании, это наличие рецепторной чувствительности к гормонам у опухоли.

1. ER / PR (Эстрогеновые и прогестероновые рецепторы, ER- еstrogen receptor, PR-progesterone receptor)

ER и PR — протеиновые рецепторы на поверхности опухолевых клеток. 

В организме человека постоянно вырабатываются гормоны — эстроген и прогестерон. Эти гормоны воздействуют на ER и PR рецепторы, что приводит к стимуляции роста опухолевых клеток.

Определение Эстрогеновых и Прогетестероновых рецепторов является одним из важнейших моментов, определяющих чувствительность опухоли к терапии гормональными препаратами.

Чаще всего наличие рецепторов ER/PR определяют при раке молочной железы. Их наличие дает возможность, помимо стандартных методов лечения, применить гормональную терапию.


При гормон позитивном раке молочной железы, назначаются препараты: Тамосксифен, Экземестан (Аромазин), Летрозол (Фемара), Анастразол (Аримидекс), Гексэстрол (Синестрол) и другие.Также, считается, что гормонально-зависимый рак молочной железы отличается спокойным течением и редким метастазированием.

Чувствительность опухолевых клеток к гормональной терапии выражается в баллах от 0 до 10. Опухоль считается гормонозависимой, начиная с 2-х баллов. и требует добавления к лечению гормональной терапии.

2. Her2Neu (от англ. Human Epidermal Growth Factor Receptor 2)

Her2Neu  — это рецептор эпидермального фактора роста раковой клетки. Это — ген, который воздействует на мембранные рецепторы клетки, и стимулирует её к усиленному делению.

В некоторых опухолях (чаще всего рак молочной железы, рак пищевода, рак желудка) присутствует гиперэкспрессия (повышенная активность) Her2Neu, что вызывает быстрое деление опухолевой клетки и её повышенную активность.

Также снижается эффективность химиотерапии, лучевой терапии, гормональной терапии. Из-за этого опухоли с Her2neu позитивным статусом отличаются агрессивным течением.

Существует две методики определения наличия у опухоли гена Her2neu:


1. Иммуногистохимическое исследование

Результаты иммуногистохимического исследования выражаются в баллах:

  • 0-1 означает, что опухоль без гиперэкспрессии Her2neu.
  • 3 означает, что опухоль с гиперэкспрессией Her2neu.

2. Метод FISH (Флуоресцентная гибридизация in situ)

В отличие от иммуногистохимического исследования, при котором определяются белки, при методе FISH определяется наличие генов, кодирующих протеины Her2neu. В зависимости от их наличия, определяется гиперэкспрессия Her2neu.

Определение гиперэкспрессии рецептора Her2neu в опухоли молочной железы является очень важным для дальнейшего назначения лечения.

В современной онкологии гиперэкспрессию Her2neu определяют, чтобы понять, необходимо ли добавление к лечению ингибиторов Her2neu. Для лечения опухолей с гиперэкспрессией рецептора Her2Neu активно и успешно используются таргетные препараты Трастузумаб (Герцептин), Пертузумаб (Перьета), Трастузумаб-эмтанзин (Кадсила), Бейодайм (Трастузумаб+Пертузумаб). Эти препараты прицельно блокируют рецепторы Her2neu, тем самым останавливая активный рост опухолевых клеток и повышая их чувствительность к химиопрепаратам. Добавление таргетной терапии к стандартной химиотерапии при лечении Her2neu позитивных опухолей, серьезно увеличивает общую выживаемость и результат противоопухолевого лечения.


иммуногистохимическое исследование.jpg

3. Ki-67

Ki-67 — это маркер пролиферативной активности опухолевой клетки. Данный параметр оценивается в процентах и показывает, сколько процентов опухолевых клеток активно делятся.

Если Ki-67 меньше 15%, опухоль считается слабоагрессивной, при показателе Ki-67 от 30 до 50% опухоль считается агрессивной, а при показателе Ki-67 выше 50% опухоль является высокоагрессивной.

Также Ki-67 является фактором прогноза течения опухолевого заболевания и ответа опухоли на химиотерапевтическое лечение. Определяется это простым способом: чем ниже показатель Ki-67, тем хуже опухоль реагирует на химиотерапевтическое лечение. И наоборот — чем выше показатель Ki-67, тем лучше опухоль будет отвечать на химиотерапию.


4. Белок p53

Белок p53 — это транскрипционный фактор, регулирующий клеточный цикл. В быстро делящихся клетках обнаружено увеличение концентрации белка р53 по сравнению с клетками, делящимися медленно, что обусловлено высоким риском их онкогенности. 

Белок p53 предотвращает образование злокачественных опухолей в нашем организме. В норме, антионкоген р53 находится в неактивном состоянии, а при появлении повреждений ДНК в здоровой клетке — активируется. 

Функция белка р53 состоит в удалении тех клеток, которые являются потенциально онкогенными. Это называется — индуцированный апоптоз, уничтожение потенциально опасной клетки. 

При иммуногистохимическом исследовании, повышенное содержание  белка p53 обнаруживается в  50% злокачественных клеток, что позволяет им беспрепятственно делиться и избегать апоптоза (уничтожения).

Количество белка p53, определяют в дополнение к показателю Кi67, для того, чтобы понять насколько агрессивна опухоль и определить дальнейшее течение болезни. Если уровень белка p53 высокий, значит опухоль не агрессивная и не склонна к метастазированию и быстрому росту. Если же, показатель белка p53 низкий, то значит опухоль агрессивна и склонна к быстрому росту в окружающие ткани и метастазированию.

 ИГХ.jpg

5. VEGF (Фактор роста эндотелия сосудов)

VEGF  – это сигнальный белок, вырабатываемый клетками для активного роста новых сосудов в уже существующей сосудистой системе.


Есть несколько видов белка VEGF, и каждый воздействует на определенный рецептор VEGFR (Vascular endothelial growth factor receptor). Для того чтобы активно делиться, опухоли нужно питание, а для этого нужны сосуды, по которым это питание будет поступать. Именно по этой причине в опухолевых клетках содержится повышенное содержание белка VEGF — для того, чтобы в короткие сроки строить сосудистые сети.

Наличие белка VEGF в опухоли говорит о возможности применения таргетной терапии такими препаратами, как Бевацизумаб (Авастин), Рамуцирумаб (Цирамза), Афлиберцепт (Залтрап). Они перестраивают сосудистую сеть опухоли, тем самым лишая её питания.

Источник: worldofoncology.com

Описание процедуры

Учеными установлено, что клетки злокачественных опухолей вырабатывают специфические белки — антигены. Иммунная система воспринимает эти вещества, как чужеродные агенты и начинает вырабатывать против них антитела. Таким образом организм человека пытается бороться с опухолью.


На реакции антигенов и антител и основано ИГХ-исследование. Что это такое? При проведении иммуногистохимии берется на анализ кусочек ткани. Его обрабатывают антителами к различным видам злокачественных клеток. Затем материал изучают под микроскопом и наблюдают за реакцией.

Если в кусочке ткани содержатся раковые клетки, то их антигены вступают во взаимодействие с антителами. При этом в биоматериале отмечается свечение (флуоресценция). Это является признаком наличия злокачественных клеток. Такой метод позволяет выявить онкологические заболевания с точностью 100 %.

Методика анализа

Пациенту делают биопсию перед ИГХ-исследованием. Что это такое? Под местной анестезией из опухоли отщипывают кусочек ткани (биоптат). Этот материал и исследуют под микроскопом. В некоторых случаях на анализ берут ткани, удаленные в ходе хирургической или эндоскопической операции.

Затем биоптат обезжиривают и обрабатывают парафином. Это необходимо для сохранности материала. В результате получают парафиновые блоки, которые затем нарезают чрезвычайно тонкими слоями.

Полученные срезы обрабатывают препаратами с антителами к разным видам злокачественных клеток. Могут использоваться следующие наборы для анализа:

  1. Малая панель. В этот набор входит до 5 антител.
  2. Большая панель. Может содержать от 6 до нескольких десятков видов антител.

Выбор необходимых антител для исследования зависит от предполагаемого диагноза. В направлении на анализ лечащий врач указывает — какие именно виды антигенов необходимо выявить у пациента. В зависимости от этого и подбирают реагенты для теста.

Получить результаты анализа на руки можно спустя 1 — 2 недели после проведения исследования.

Что показывает анализ

Нередко пациентам назначаю одновременно гистограмму и ИГХ-исследование. Что это такое, и чем отличаются эти два вида анализов? При гистограмме биоматериал исследуют под микроскопом и определяют наличие раковых клеток. При иммуногистохимическом исследовании злокачественные новообразования выявляют с помощью реакции «антиген — антитело». Такой способ исследования считается более информативным.

ИГХ показывает не только наличие атипичных клеток. С помощью этого исследования можно выявить:

  • разновидность новообразования;
  • распространение онкологического процесса;
  • расположение первичной метастазирующей опухоли;
  • стадию рака;
  • темпы роста опухоли.

Кроме этого, с помощью иммуногистохимии можно определить чувствительность раковых клеток к химиопрепаратам и облучению. Это позволяет выбрать наиболее эффективный метод лечения.

Показатели

В расшифровке ИГХ-исследования указывают концентрацию антигенов злокачественных новообразований. В норме такие белки должны полностью отсутствовать. Их наличие в биоматериале указывает на развитие опухоли. Чем выше концентрация антигенов, тем активнее происходит разрастание новообразования.

Кроме этого, в результатах анализа указывают разновидность атипичных клеток и их количество. Точно интерпретировать данные теста может только врач-онколог.

Выявление рака груди


Этот анализ назначают при подозрении на рак молочной железы. ИГХ-исследование в этом случае помогает выявить не только наличие злокачественных клеток, но и чувствительность рецепторов новообразования к гормонам. Ведь нередко рост опухоли молочных желез зависит от уровня эстрогенов и прогестерона. С помощью этого исследования можно также оценить необходимость назначения гормональных лекарств.

Для диагностики рака молочной железы используется специальный набор маркеров. В расшифровке анализа необходимо обратить внимание на концентрацию антигена Ki-67. По этому показателю можно судить о прогнозе заболевания, ведь он указывает на скорость роста опухоли.

Концентрация антигена определяется в процентах. В зависимости от уровня Ki-67 подбирается метод лечения:

  1. Менее 15 %. Прогноз заболевания считается благоприятным. Возможно излечение с помощью гормональной терапии.
  2. От 16 до 30 %. Умеренный рост новообразования. Распространение опухоли можно приостановить с помощью гормонов.
  3. Более 30 %. Такая концентрация антигена свидетельствует о быстром росте раковой опухоли. Необходимо назначение химиотерапии.

Если показатель антигена составляет менее 10%, то в подавляющем большинстве случаев рост опухоли удается остановить с помощью гормонов. Крайне опасной считается концентрация Ki-67 более 90 %. Это указывает на запущенную стадию рака. В таких случаях заболевание чаще всего приводит к летальному исходу.

Применение в гинекологии

Нередко врачи назначают пациенткам ИГХ-исследование при дисплазии шейки матки. Эта патология сопровождается перерождением здоровых клеток в атипические. Такое состояние врачи оценивают как предраковое. Дисплазия 3 степени практически всегда приводит к образованию злокачественной опухоли на шейке матки.

ИГХ помогает оценить риск развития онкологических заболеваний у пациенток с дисплазией. Для исследования используют антитела к белкам p16INK4a и Ki-67.

При анализе определяют не только концентрацию антигенов, но и соотношение между уровнями вышеуказанных белков. Референсные значения показателей исследования индивидуальны и зависят от предполагаемого диагноза. Точно расшифровать результаты теста может только лечащий врач. Высокие показатели концентрации антигенов и соотношения между p16INK4a и Ki-67 указывают на большой риск развития рака шейки матки.

Где можно сдать

Где проводят ИГХ-исследование? Такой тест можно сделать во многих коммерческих медицинских центрах и лабораториях (например, в «Инвитро» или «Гемотесте»), а также в крупных онкологических медучреждениях. Проведение анализа не требует пребывания пациента в стационаре, за исключением тех случаев, когда исследование проводится после хирургического вмешательства.

Иммуногистохимия не входит в перечень услуг, которые предоставляются по полису ОМС. Поэтому такой анализ можно сдать только платно. Его цена варьируется от 4000 до 20 000 рублей. Стоимость теста зависит от количества антигенов, которые предстоит выявить в биоптате. Чем большее количество маркеров указано в направлении на анализ, тем выше цена исследования.

Источник: FB.ru

Что это такое

Метод иммуногистохимии используют как дополнительный. Он помогает выявить в биологическом материале специфичные белки, которые характерны для определенного вида клеток и, как следствие, отличить одну разновидность опухолевого образования от другой. Также исследование помогает выявить:

  1. Маркеры иммуногистохимии, которые отвечают за чувствительность опухоли к воздействию лекарственных средств, лучевой терапии.
  2. Метастатический характер происхождения образования и определить первичный источник поражения.
  3. Гормоны и рецепторы к ним.
  4. Малигнизацию клеток.

ИГХ как метод диагностики широко применяется в онкологии. Этот вид изучения тканей предполагает применение определенных реактивов. Они содержат в себе антитела или белковые соединения, которые помечены определенными веществами.

ВАЖНО! Антитела (иммуноглобулины, специфические белки) вырабатываются различными клетками организма и обеспечивают иммунитет, при внедрении антигена. Часто вырабатываются при попадании вирусов, бактерий, при онкологии, вакцинации, пересадке тканей, а иногда и против собственных клеток, что приводит к аутоиммунным патологиям. Получают их от различных животных.

При контакте с антигенами, которые могут содержаться в исследуемом биоптате, происходит специфическая реакция (антигенами являются межклеточные вещества ткани, компоненты клеточных структур). В результате нее можно судить о наличии или отсутствии того или иного вещества в тканях.

ВАЖНО! Антигены — генетически чужеродное тело, которое при попадании в организм вызывает иммунную реакцию, а именно выработку антител для подавления этого чужеродного агента. В случае с ИГХ-анализом антигенами выступают молекулы, которые вырабатываются патологически измененными опухолевыми клетками.

Структурная специфичность исследования — принципиально отличает ИГХ от других способов иммунологической диагностики, которые используют реакцию антиген-антитело. Т. е. специалисты оценивают помимо присутствия тех или иных веществ в тканях (при наличии или отсутствии окрашивания) и их количественный состав (по интенсивности окрашивания), еще пространственное распределение различных структурных элементов (цитоплазма, ядро, мембрана клетки и пр.) в тонком окрашенном срезе.

Способы проведения исследования

Реакцию можно получить несколькими способами. Часто применяется прямой, при котором используется один вид маркированных антител. Последние должны связаться с выявляемым веществом или молекулой-мишенью. Если последняя присутствует в биоптате, то исследуемая ткань окрашивается.

Непрямой метод считается более информативным и чувствительным. Его суть заключается в поэтапном введении 2 разных антител. Немаркированные первичные антитела вступают в реакцию с опухолевым антигеном в биоптате, образуют комплекс антитело-антиген. Затем вводят вторичные уже маркированные антитела (реагент), которые связываются с определенной частью молекулы первичного антитела. Т. е. первичные антитела являются антигенами для вторичных.

Когда назначается исследование?

ИГХ назначается в том случае, когда обычного гистологического исследования недостаточно. Например, когда опухоль молочной железы имеет неспецифичное микроскопическое строение, не позволяющее поставить точный окончательный диагноз.

Что показывает

Биопсия с иммуногистохимией являются важной частью верификации диагноза при раке молочной железы, предстательной железы, мягких тканей и пр. Особенно актуально исследование для выявления лимфом, поскольку зачастую диагностировать эту болезнь без ИГХ невозможно. Большую роль ИГХ исследование играет в определении гистологического типа недифференцированных опухолевых образований, а также метастазов, которые имеют невыясненный первичный очаг.

Иммуногистохимия рака молочной железы полезна в прогнозировании течения опухолевого процесса и возможности таргентной терапии. Она помогает оценить:

  • функциональное состояние клеток образования;
  • злокачественный потенциал и темп роста опухоли;
  • тенденцию к метастазированию.

Как делается анализ?

Чтобы провести исследование, необходимы образцы самой опухоли и близлежащих тканей. Их можно получить при биопсии или после хирургического вмешательства. Материалу необходимо пройти несколько этапов подготовки перед исследованием: фиксация, промывание, обезвоживание, погружение в парафин или заливка другим веществом.

Исследуемый биологический объект должен получиться плотным, но не хрупким. Сначала материал промывают, обезвоживают и уплотняют в спиртах возрастающей крепости. Затем его просветляют путем погружения в смесь абсолютного спирта и О-ксилола в пропорции 1:1. После этого помещают в несколько порций чистого О-ксилола. И только потом биологический объект пропитывают в парафине. Последний этап помогает законсервировать ткань и на долгое время сохранить ее структурные особенности в парафиновом блоке.

Затем лаборант производит с этих блоков срезы, при помощи специального прибора — микротома, толщиной до 1 мкм. Полученные срезы наклеивают на предметное стекло, которое смазано глицерином и смесью белка. Подсушивают.

Чтобы исследуемый материал вступил в реакцию с антителом, необходимо его обезжирить и удалить парафин. Процедура называется депарафинизация. Для ее проведения используют 3 порции О-ксилола, а также спирты нисходящей крепости.

Последний этап — окрашивание. Оно проводится для того, чтобы четко видеть структуру тканей под микроскопом. Лаборанты могут использовать огромное количество красителей. Условно их можно классифицировать по:

  • происхождению, например, животные — кармин, растительные — гематоксилин, синтетические — эозин;
  • химическим свойствам, например, нейтральные, основные, кислые.

Чаще всего для этой процедур используют эозин, гематоксилин. Биологический материал помещают в раствор гематоксилина на несколько минут, затем промывают и дифференцируют результаты окрашивания. После этого провидится окрашивание в эозине, промывание и обезвоживание в спиртах восходящей крепости. Последовательная многоэтапная окраска позволяет на каждом этапе все больше определить нозологию и фенотип опухолевого образования. Патоморфолог изучает материл под микроскопом после каждого окрашивания. И только после оценки изменений и интерпретации полученной информации, назначает панель антител.

Чтобы получить точные данные о патологическом процессе и верифицировать заболевание  лаборант приступает к обработке подготовленного образца специальными реактивами, содержащими меченые антитела. В результате происходит реакция между антителом и антигеном. Это сопровождается характерной визуализацией, которая зависит от веществ, используемых для маркировки.

Что означают результаты?

Иммуногистохимия молочной железы — это сложный многоступенчатый анализ, на результат которого влияет множество факторов, например, низкое качество реагентов, недостаточная фиксация исследуемого биологического объекта или неправильно подобранная панель антител. Количество искомых клеток-мишеней исчисляется сотнями, поэтому специалист должен понимать, что он ищет и использовать для этого необходимые антитела.

Гистологи оценивают интенсивность окрашивания опухолевых клеток после взаимодействия с реактивами по специальной шкале:

  • 0-1+ — онкологии нет;
  • 2+ — онкологическое образование отрицательное;
  • 3+ — онкологическое образование положительное.

Длительность ИГХ при раке молочной железы во многом зависит от способа его проведения. Бывает ручной и автоматический. Последний считается более совершенным, поскольку вероятность технической ошибки сведена к минимуму, да и проводится он гораздо быстрее.

Перед определением тактики лечения онколог задается различными вопросами: какова вероятность рецидива заболевания у больного или его смерти, какой результат лечения можно ожидать. Для этого специалист изучает особенности и характеристики опухоли и в зависимости от различных предсказывающих и прогностических факторов назначает тактику лечения.

Прогностические факторы

К этим факторам относятся основополагающие признаки, которые определяют особенность протекания болезни и ее исход. При операбельных формах онкологии груди к таким факторам относятся: морфологическое строение новообразования и его размер, состояние лимфоузлов. Т. е. подобные характеристики определяют хронологию болезни.

Особенности прогностических факторов:

  1. Базируются на биологических характеристиках опухолевого образования.
  2. Взаимосвязаны с продолжительностью жизни пациента в независимости от тактики терапии.
  3. Делят пациентов по степени риска смерти, рецидива.
  4. Примеры: индекс митотической активности, протеолитические ферменты, антиогенез и др.

Индекс митотической активности (MAI) является независимым прогностическим фактором, который характеризует продолжительность жизни больных. У пациентов с индексом меньше 10 в процессе наблюдения летальный исход составлял 6 %, у пациентов с индексом больше 10 — 28 %.

Протеолитические ферменты имеют значение в процессе метастазирования. В трансформированных злокачественных клетках таких ферментов вырабатывается больше, чем в здоровых, поэтому при злокачественных образованиях наблюдается выход этих веществ в межклеточное пространство и увеличение активности. Т. е. ферменты вовлечены в процесс онкогенеза. Т. о. пациенты с низким уровнем этих ферментов имеют более благоприятный прогноз по безрецидивной выживаемости.

Способность новообразования расти и метастазировать во многом зависит от ангиогенеза — образования новых кровеносных сосудов. В процессе наблюдения пациентов в течение 10 лет, было выявлено, что у женщин с высоким значением плотности микрососудов в опухоли прогноз хуже.

Предсказывающие факторы

Эти факторы предсказывают эффективность лечения. Они помогают выделить группу пациентов с более-менее значимым ответом на проводимую терапию. К примеру, опреелить эффективность гормональных препаратов, уровень рецепторов стероидных гормонов.

К клиническим факторам, которые помогают интерпретировать ответ на терапию при метастатической форме рака относятся:

  1. Локализация и количественный показатель метастазов. Например, при поражении кости — прогноз относительно благоприятный; поражение кости, 2 органов, легких — менее благоприятный; при поражении больше 2 органов, наличии метастаз в печени, мозгу и пр. — неблагоприятный.
  2. Временной интервал между лечением первичного новообразования и появления метастазов. Чем он продолжительнее, тем благоприятнее прогноз.
  3. Общее состояние здоровья пациента.
  4. Возрастная категория. Женщины в постменопаузе имеют больше шансов на благоприятный ответ на терапию.
  5. Рецепторы стероидных гормонов в опухоли (гормононезависимые новообразования не реагируют на гормональное лечение).

Метастатический рак молочных желез считается хронической патологией. После полного регресса, полученного в результате химиотерапии, продолжительность жизни 5-10 лет встречается достаточно редко, примерно в 5-20 % случаев. Поэтому для лечения считается оптимальным вариантом — последовательное применение лечебных воздействий с как можно меньшей токсичностью, чтобы получить максимальный паллиативный эффект и отсрочить прогрессирование патологии, смерти.

Достоверность результатов ИГХ молочной железы достигает 99 %. Методика чувствительна и высокоспецифичная. Она помогает верифицировать патологический процесс и установить стадию заболевания. Для ее проведения необходимо минимум биоптата и реактивов, при этом она будет информативна даже спустя длительное время после взятия биопсии.

Источник: www.mammologia.ru


Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

*

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте как обрабатываются ваши данные комментариев.