Иммуногистохимия что это за анализ


Иммуногистохимия, или иммуногистохимический анализ — исследование, во время которого в образцах ткани с помощью антител выявляют определенные молекулы. Этот метод диагностики нашел широкое применение в онкологии.

Немного теории и истории. Для того чтобы обнаруживать и уничтожать чужеродные вещества, иммунная система использует особые молекулы — антитела. Они отличаются специфичностью: каждое антитело может связываться строго с определенным антигеном.

В 1941 году американский иммунолог Альберт Кунс впервые решил использовать антитела в лаборатории, чтобы «распознавать» с помощью них белки бактерий. В 1984 году биохимик из Аргентины Сезар Мильштейн получил Нобелевскую премию за то, что создал гибрид опухолевой клетки с лимфоцитом, которая могла синтезировать моноклональные антитела. После этого началось производство моноклональных антител для диагностических и лечебных целей.

В 1994 г. С. Тэйлор применил иммуногистохимический анализ, чтобы проверить 20 000 опухолей, и обнаружил, что диагнозы в половине случаев были ошибочными. Иммуногистохимия зарекомендовала себя как эффективный метод диагностики.

Какие задачи в онкологии помогает решать иммуногистохимия?

Иммуногистохимический анализ помогает врачам-онкологам:


  • Отнести злокачественную опухоль к тому или иному типу.
  • Выяснить, в каких генах опухолевых клеток произошли мутации, какие белки способствуют прогрессированию рака.
  • Выявить первичную опухоль и ее метастазы.
  • Определить, произошла ли злокачественная трансформация клеток.
  • Определить прогноз для пациента.
  • Разобраться, поможет ли в данном случае таргетная терапия.
  • Определить, чувствительны ли опухолевые клетки к химиотерапии, лучевой терапии.

Как это работает?

Иммуногистохимия что это за анализ

Иммуногистохимия бывает прямой и непрямой. В первом случае используют один вид антител, которые должны вступить в связь с определенной молекулой-мишенью. Если молекула-мишень присутствует в ткани, и реакция произошла, опухолевая ткань окрашивается:

  • Чаще всего к антителу присоединяют фермент, например, пероксидазу. Этот фермент катализирует химическую реакцию, которая приводит к изменению цвета.
  • Иногда к антителу присоединяют флюоресцин или родамин, при этом окрашивание выявляют с помощью флюоресцентной микроскопии.
  • всего применяют непрямую иммуногистохимию. При этом используют два антитела. Одно соединяется с антигеном, второе — с полученным комплексом антиген-антитело. Маркер, который вызовет изменение цвета, связывают со вторым антителом.

Непрямой метод имеет некоторые преимущества:

  • Он обладает более высокой чувствительностью, потому что с одним первичным антителом (тем, которое связывается с белком-мишенью) может связаться несколько вторичных антител.
  • Исследование занимает немного времени: для того, чтобы произошла реакция, нужно примерно 3 часа.
  • Непрямая иммуногистохимия требует небольшого количества антител. Например, вторичное антитело, направленное на иммуноглобулины кролика, будет реагировать на любое первичное антитело «кроличьего» происхождения. Не нужно создавать много разных видов вторичных антител с окрашивающей или флуоресцентной меткой.

Как проводят исследование?

Для того чтобы выполнить иммуногистохимический анализ, нужно получить опухолевую ткань, то есть провести биопсию. В качестве материала можно использовать столбик ткани, полученный во время трепан-биопсии, фрагмент тканей или даже целый орган, удаленный во время операции.

Иммуногистохимия что это за анализ

Образец ткани фиксируют с помощью формальдегида (иногда используют метанол, ацетон и другие фиксаторы — это зависит от того, какой антиген нужно выявить, и реагирует ли он с теми или иными фиксаторами) и погружают в парафин. Парафинизация помогает законсервировать ткань, сохранить ее структуру на длительное время.


Затем ткань, помещенную в парафин, нарезают с помощью специального инструмента — микротома — на слои толщиной 3–5 мкм. Эти тонкие срезы помещают на стекло, покрытое, специальным клеем.

Некоторые образцы слишком чувствительны к реагентам, которые применяют во время вышеописанной процедуры. Их нельзя помещать в парафин. Такие ткани замораживают жидким азотом. Этим альтернативным методом пользуются редко, только в случае необходимости, так как у заморозки есть некоторые недостатки: она делает изображение под микроскопом не таким четким, требует специальных условий хранения образцов. Фиксацию ткани в таких случаях проводят уже после нанесения на стекло и размораживания, ацетоном или формальдегидом.

После того как срезы нанесены на стекло, из них нужно удалить весь парафин, иначе антитела не прореагируют с антигеном. Эта процедура называется депарафинизацией. Ее проводят с помощью ксилола. Затем выполняют еще некоторые подготовительные процедуры, чтобы антитела могли успешно прореагировать с нужными антигенами, и, наконец, проводят непосредственно иммуногистохимический анализ. Обработанную антителами ткань рассматривают под микроскопом, чтобы проверить, окрасилась ли она.

Какие молекулы-мишени выявляют во время иммуногистохимии?

Количество возможных мишеней измеряется сотнями. Перед исследованием врач должен понимать, что он ищет, и использовать соответствующие антитела. В онкологии мишенями являются опухолевые маркеры — вещества, которые в здоровых клетках отсутствуют вообще или присутствуют в значительно меньшем количестве. Вот некоторые примеры:


  • Рецепторы к эстрогенам и прогестерону помогают идентифицировать гормонально-позитивный рак молочной железы и разобраться, помогут ли женщине гормональные препараты.
  • Простатспецифический антиген (ПСА) имеет значение в диагностике рака простаты.
  • Альфа-фетопротеин — присутствует в гепатоцеллюлярной карциноме (рак печени).
  • Цитокератины помогают в диагностике рака и некоторых сарком (злокачественных опухолей соединительной ткани).
  • Фермент CD10 (CALLA) связан с карциномой почек, лимфобластным лейкозом.

Иммуногистохимия что это за анализ

Какова роль иммуногистохимии в современной онкологии?

Иммуногистохимический анализ помогает изучить характеристики злокачественной опухоли, которые не могут выявить другие методы диагностики. Зачастую это играет важную роль в уточнении диагноза и назначении правильного лечения. Врач может определить, какие комбинации препаратов будут наиболее эффективны для конкретного больного, иными словами, реализуется принцип персонализированного лечения. Зачастую это помогает улучшить результаты, подобрать эффективное лечение для пациентов, которым не помогает стандартная терапия.

Источник: www.euroonco.ru

Что такое иммуногистохимия


Иммуногистохимия – это высокоточный метод диагностики, который позволяет выявить и идентифицировать антигены опухолей – специфические вещества, которые присущи раковым клеткам. В настоящее время иммуногистохимический анализ используется для диагностики злокачественных опухолей, и позволяет установить точный диагноз. Кроме того, с помощью иммуногистохимии врач может оценить, какой будет ответная реакция на лечение.

Иммуногистохимическое исследование позволяет верифицировать результаты ранее проведенных исследований, а также исключить другие возможные раковые заболевания. Примечательно, что назначение тех или иных препаратов для лечения рака также должно быть подтверждено иммуногистохимическим исследованием.

Суть исследования

Иммуногистохимический тест заключается в исследовании клеток ткани опухоли, которое проводится с помощью специальных реактивов. Эти реактивы содержат антитела – специфические белки, меченые определенными веществами, которых можно детектировать (например, флуоресцентные красители, ферменты, коллоидное золото и другие).


Антитела имеют специфическую пространственную структуру, которая позволяет им связываться с антигеном – искомым веществом в опухолевых клетках. Такая химическая реакция называется «антиген-антитело», и указывает на наличие специфических для опухоли веществ во взятом образце.

В частности, в ходе иммуногистохимического исследования могут искать некоторые рецепторы к гормонам (например, эстрогену, прогестерону и другим), онкологические маркеры, маркеры усиленного роста раковых клеток и другие антигены.

В клинической практике чаще всего применяется метод непрямой иммуногистохимии, когда антигены, полученные из ткани пациента, связывают с первичными антителами. Так получается комплекс «антиген-антитело», к которым прикрепляют вторичные антитела. Такой комплекс можно окрасить специальными красителями, и по выраженности окраски специалисты оценивают статус опухоли.

В каких целях проводится иммуногистохимия

Если пациенту назначается иммуногистохимия, то этим врач преследует несколько целей:

  • Иммуногистохимия позволяет выявить гистологическую и нозологическую принадлежность опухоли. С помощью этого исследования определяется класс новообразования.
  • С помощью иммуногистохимии определяется локализация первичного очага новообразования. В частности, если месторасположение не установлено, то выявить его можно и по отдельному метастазу.

  • Иммуногистохимия позволяет определиться с тактикой лечения. В частности, этот метод исследования позволяет выявить чувствительность опухолевых клеток к воздействию препаратов таргетной терапии или химиотерапии. С помощью иммуногистохимии врачи определяют резистентность опухоли к некоторым группам химиотерапевтических препаратов. Например, опухоли молочной железы, которые имеют рецепторы к эстрогену лечат немного иначе (в протокол лечения добавляется гормональная терапия). Исследования на протоонкоген her-2-neu позволяют выяснить чувствительность раковой опухоли молочной железы на некоторые противоопухолевые препараты. Если говорить о тесте на маркер пролиферации, то с его помощью определяется степень агрессивности опухоли.

Как проводится иммуногистохимия

Для проведения иммуногистохимии изначально пациенту назначается биопсия – взятие образца опухолевой ткани. В настоящее время существует несколько методик проведения биопсии. Как правило, эта процедура выполняется с помощью тонкой иглы, которой можно извлечь образец ткани. Опухоли, которые располагаются в сложных участках (например, головном мозгу), проверяются уже после оперативного удаления. Полученную в ходе операции опухоль отправляют в лабораторию на гистологическое исследование.


Полученный в ходе биопсии материал фиксируют и подготавливают к работе. Образец заливают парафином (что позволяет его хранить долгое время), после чего делают срезы и помещают на стекла для проведения иммуногистохимических исследований (обработка антителами и окрашивание).

Источник: www.likar.info

Принципы и техника ИГХ (видео)

Показания и противопоказания к проведению

Как правило, исследование назначается при подозрении на онкологию, патологические процессы в ткани в любом из органов пациента. ИГХ показан к проведению при подозрении на следующие патологии:

  • рак молочных желез или первичную опухоль груди у женщин;
  • бесплодие;
  • болезни матки со злокачественным течением;
  • развитие гиперплазии, эндометрита, иного недуга в репродуктивной системе.

Изучению также подлежит:

  • гормональный фон, именно уровень прогестерона и эстрогена, от которого напрямую зависит скорость роста опухолевидного тела и стадия развития болезни;
  • ткань эндометрия при частых выкидышах, неудачных попытках ЭКО, подозрении на бесплодие.

Именно иммуногистохимическое исследование может выявить наличие клеток, препятствующих зачатию у женщин, реакцию рецепторов в маточной ткани при назначении гормонально-заместительной терапии. Это важно выявить для разработки лечебной тактики и необходимости определить, следует вводить или нет гормоны, поскольку при выработке их в норме новообразование не столь прогрессивно, растет медленно и быстро подлежит устранению. Возможные рецидивы сведены к нулю.

Иммуногистохимия что это за анализ» alt=»Как проводится и расшифровывается иммуногистохимическое исследование» width=»800″ height=»534″ sizes=»(max-width: 800px) 100vw, 800px» data-srcset=»/wp-content/uploads/2017/07/gistissl4.jpg 800w,/wp-content/uploads/2017/07/gistissl4-300×200.jpg 300w,/wp-content/uploads/2017/07/gistissl4-768×513.jpg 768w, https://bolitgrud.com/wp-content/uploads/2017/07/gistissl4.jpg»>
Иммуногистохимическое исследование незаменимо с целью назначения эффективного лечения

Показатель Ki 67 указывает на быстроту роста опухоли. Если его значение превышает отметку в 35%, значит, новообразование растет быстро и уже не обойтись без назначения курса химиотерапии во избежание появления метастазов. Анализ с показателем менее 10% дает прогнозы вполне оптимистичные, выживаемость пациенток – 95%, а вот при показателе более 85% летальность уже неизбежна.


Иммуногистохимическое исследование назначается почти всем женщинам, независимо от возраста, при подозрении на рак груди, т. к. метод практически не имеет противопоказаний. Трудности представляет лишь болезненный забор образца патологичной ткани, и многие пациентки тяжело переносят проведение биопсии. Хотя стоит потерпеть, ведь чем быстрее будет начато лечение, тем больше шансов на полное выздоровление.

В зависимости от вида опухоль может быстро прогрессировать. Если не выявить ее на начальном этапе формирования, то с появившимися метастазами бороться будет гораздо труднее.

Как проводится?

Материал берется из опухолевидной ткани путем прокола или с помощью раны, оставшейся после проведенной операции. Исследование – поэтапное:

  1. Забор (иссечение) образца ткани преимущественно из груди у женщин с постановкой отметины черным маркером в предполагаемом месте локализации образования.
  2. Отправка ткани в лабораторию с помещением в емкость с формалином. Возможно окрашивание сывороткой с содержанием антител, ферментов, металлопротеина, флуоресцентного красителя с добавлением в разных дозах. Данные вещества послужат метками, чтобы было лучше визуально наблюдать за происходящей реакцией при соединении антител с антигеном. Если, например, реакции не произойдет при использовании в качестве метки металла или радиоизотопа, значит, и опухоли как таковой в организме нет.
  3. Обезжиривание состава, заливка парафином, чтобы получить блоки для последующего изучения материала на гистологию.
  4. Помещение на стекла срезов в 1 мм толщиной, сделанных из блоков.
  5. Окрашивание состава антителами.
  6. Изучение (интерпретация) анализов.

Обычно заключение врачи дают по истечении 7 дней. Будет выявлено сходство (родство) ткани к тем или иным антителам, описана морфология образца, количество присутствующих здоровых и замещенных патологичных клеток.

Иммуногистохимия что это за анализ» alt=»Как проводится и расшифровывается иммуногистохимическое исследование» width=»800″ height=»597″ sizes=»(max-width: 800px) 100vw, 800px» data-srcset=»/wp-content/uploads/2017/07/gistissl3.jpg 800w,/wp-content/uploads/2017/07/gistissl3-300×224.jpg 300w,/wp-content/uploads/2017/07/gistissl3-768×573.jpg 768w, https://bolitgrud.com/wp-content/uploads/2017/07/gistissl3.jpg»>
Иммуногистохимическое исследование назначается почти всем женщинам, независимо от возраста, при подозрении на рак груди

Используемые маркеры

Выявить опухоль в молочной железе можно с помощью широко используемых иммуногистологических маркеров:

  1. HER2, реагирующий на рецепторы в виде антенн, лежащих на поверхности клеток, способных уловить сигналы, подаваемые организмом. Клетки вполне нормально делятся, если количество рецепторов не отклонено от нормы. Но иногда ген при остром течении опухоли дает сбой и начинает выработку множества рецепторов одновременно. При этом клетки усиленно делятся, получая подобный опасный сигнал. Это говорит о начальной стадии развития рака и стремительном течении, хотя прогнозы хорошие. Опухоль неплохо поддается специфическим лекарствам.
  2. HER2 neu, способный выявить кодирующий рецептор или протоонкоген, при повышенном содержании которого рак прогрессирует и, скорее всего, в регионарных лимфоузлах присутствуют метастазы. Для назначения адекватного лечения крайне важно установить характер (отрицательный, положительный) HER2. При значении “+” будут назначены лекарства Герцептин, Лапатиниб. При отрицательном показателе данные препараты противопоказаны.
  3. Ki 67, как маркер пролиферации, способный выявить степень и скорость деления патологичных клеток. Опухоль не агрессивна при показателе маркера меньше 15%. Лечение сводится к проведению гормонотерапии. Реакция рецептора к прогестерону и эстрогену вполне позитивная, равно как и прогнозы после лечебного курса. Опухоль быстро растет, если показатель превышает 30%. Требуется проведение химиотерапии.

При раке молочной железы реакция и степень окрашивания забранной ткани будут напрямую зависеть от подтипа:

  • люминального А, при котором HER2 будет отрицательный, а – Ki 67 не более 13%;
  • люминального В, при котором HER2 – отрицательный, а Ki 67 – свыше 15%;
  • Erb-B2 как сильно прогрессирующего, при котором HER2 – положительный, но рецепторы к прогестерону и эстрогену отсутствуют;
  • базальновидного, при котором наблюдаются отрицательные значения на любой фактор.

Иммуногистохимические исследования (видео)

Интерпретация анализов

Только патологоанатом или онколог со специальной подготовкой к проведению данного обследования сможет дать правильное заключение после использования метода и расшифровки результатов. Последняя проводится с учетом показателей вводимых антител, их тропности к исследуемому материалу. Выявляются те или иные антигены, указывающие на количество атипичных клеток, структуру и морфологию патологичной ткани, вид развивающейся опухоли.

Показатели в результатах напрямую зависят от развития того или иного заболевания. Более всего иммуногистохимическое обследование как анализ информативно при онкологии груди.

В учет берутся следующие показатели, которые показывает расшифровка:

  1. Протеины, оцениваемые по шкале от 0 до +3. При отметке 0 реакции не произойдет. При отметке +1 исследование на подтверждение онкологического статуса HER2 придется пациентам пройти вновь. При отметке +2 нет четкости в характере HER2 и возможно назначение дополнительного метода FISH. При отметке +3 HER2 – положительный результат, при котором активно вырабатывается специальный рецептор. Течение рака – быстрое и агрессивное. Вероятно назначение лекарств – Герцептина, Тайверба.
  2. Маркер Ki 67 укажет на злокачественность новообразования, хотя при отметке менее 15% прогноз хороший. Излечиться можно полностью.

При расшифровке исследуется экспрессия ПР и ЭР, как рецепторов к эстрогену и прогестерону. У большинства опухолей статус ЭР(+) и всего в 5% случаев статус ЭР(-) ПР+. Опухоли с высокой концентрацией гормонов ПР и ЭР обычно неагрессивны и малоактивны, успешно лечатся гормональными препаратами. При их экспрессии к эстрогенам прогноз благоприятен в половине случаев.

Как проводится и расшифровывается иммуногистохимическое исследование» class=»aligncenter» width=»800″ height=»533″ data-srcset=»/wp-content/uploads/2017/07/gistissl5.jpg 800w,/wp-content/uploads/2017/07/gistissl5-300×200.jpg 300w,/wp-content/uploads/2017/07/gistissl5-768×512.jpg 768w, https://bolitgrud.com/wp-content/uploads/2017/07/gistissl5.jpg»>

При экспрессии же рецепторов опухоли как к эстрогену, так и прогестерону на благоприятный исход лечения можно рассчитывать в 80% случаев. Благодаря результатам экспрессии врачам удается понять, какое лечение станет более эффективным – гормональное или же агрессивное, химическое.

Самой сложной формой при раке молочной железы является карцинома, когда процентное содержание белка в ткани чрезмерно повышенное, а клетки становятся неуправляемыми, начинают бесконтрольное деление. При появлении неприятных симптомов в груди женщинам не рекомендуется откладывать визит к врачу и прохождение анализа. Своевременное выявление и устранение онкогенных клеток дает благоприятные прогнозы.

Иммуногистохимия позволяет выявить множество разных патологий, в частности развитие опухоли, очаг и место ее локализации. Благодаря данному методу врачами устанавливается стадия рака, скорость развития новообразования. Это важно на начальных 1-2 этапах рака при появлении одиночной опухоли, причем при расположении ее в любом органе, а не только в молочных железах.

Источник: bolitgrud.com

Литература

  1. Blaszyk H., Hartmann A., Bjornsson J. Cancer of unknown primary: clinicopathologic correlations. APMIS. 2003;111(12):1089-1094.
  2. Dabbs D.J. Diagnostic Immunohistochemistry: Theranostic and Genomic Applications. Elsevier, 4-th Edition. 2013:960.  
  3. Di Patre P.L., Carter D. Sternberg’s Diagnostic Surgical Pathology Review. Wolters Kluver, 2-nd Edition. 2015:488.
  4. Dietal M., Wittekind С., Bussolati G., von Winterfeld М. Pre-Analytics of Pathological Specimens in Oncology. Sрringer. 2015:133. 
  5. Dodd L.G, Bui M.М. Atlas of Soft Tissue and Bone Pathology. DemosMEDICAL. 2014:720.  
  6. Edge S.B, Byrd D.R., Compton C.C., Fritz A.G., Greene F.L., Trotti A. AJCC Cancer Staging Manual. Sрringer, 7-th Edition. 2011:646. 
  7. Elder D.E. Lever’s Histopathology of the Skin. Wolters Kluver, 11-th Edition. 2014:1544.  
  8. Epstein J., Netto G. Biopsy Interpretation of the Prostate. Lippincott Williams and Wilkins, 5-th Edition. 2014:450.
  9. Erickson L. Atlas of Endocrine Pathology. Sрringer, 1-st Edition. 2014:178. 
  10. ESMO Minimum Clinical Recommendations for diagnosis, treatment and follow-up of cancers of unknown primary site. Annals of Oncology. 2005;16(S.1):175-176. 
  11. Fletcher C.D.M., Bridge J.A., Hogendoorn P., Mertens F. WHO Classification of Tumours of Soft Tissue and Bone. WHO Press, 4-th Edition. 2013;5:427. 
  12. Kurman R.J., Carcangiu M.L., Herrington C.S., Young R.H. WHO Classification of Tumours of the Female Reproductive Organs. WHO Press, 4-th Edition. 2014;4:316.  
  13. Louis D.N., Ohgaki H., Wiestler O.D., Cavenee W.K. WHO Classification of Tumours of the Central Nervous System. WHO Press, 4-th Edition. 2007;1:312.
  14. Malpica A., Euscher Е.D. Biopsy Interpretation of the Uterine Cervix and Corpus. Wolters Kluver, 2-nd Edition. 2015:368. 
  15. Nishizuka S., Chen S.T., Gwadry F. et al. Diagnostic markers that distinguish colon and ovarian adenocarcinomas: identification by genomic, proteomic, and tissue array profiling. Cancer Research. 2003;63:5243-5250. 
  16. Nordi Q.C. http://www.nordiqc.org.

Источник: www.invitro.ru


Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

*

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте как обрабатываются ваши данные комментариев.